溶藻细菌开题报告

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1、一、选题的依据及意义随着全球水体富营养化的加剧，有害藻类的暴发日趋频繁，给环境、生态和经济造成了巨大的损失。对水华藻类治理的方法中，物理除藻法简单易行，见效快，可用于应急处理水华，但是物理除藻法效率低，成本高，受地域限制，不能大规模使用，而且物理法治标不治本，只在短时间内有效，不能彻底根除水华。化学药品灭杀法虽然能有效杀死藻细胞，但是需要向水体中引入新的化学成分，一些杀藻剂甚至还具有毒性，会造成二次污染；而且有些杀藻剂对藻细胞有破坏作用，可使有毒藻类分解而释放出藻毒素，对其他水生动植物造成危害，甚至还会危害人类健康。因此有必要探索快速、高效、经济的新型治理方法。基于现代生态环保理念，越

2、来越多的研究者将目光投向了水华的生物防治技术。生物方法治理水华因其具有操作简单、高效、不会带来环境的二次污染等诸多优点，被认为是最具有前途的水华防治方法之一。其中，细菌防治水华因具有独特双重优越，其既可去除水华藻细胞使得水体环境保持长期可靠的生态平衡，从而达到防治水华的目的，又可以避免藻类毒素可能富集的缺陷，被认为是一种绿色的可持续发展的理想的防治方法。溶藻细菌研究有望成为未来一段时期富有挑战的课题。但总体而言，目前对溶藻细菌的研究尚处于初级阶段，特别是我国溶藻细菌的研究更是处于起步阶段，现有报道也主要集中于对溶藻细菌的分离、鉴定及溶藻现象的描述，溶藻细菌对藻类的作用机理一直是溶藻研究

3、中的瓶颈。导致国内外罕有溶藻细菌实践应用的报道。对溶藻物质性质的研究也较少，大部分溶藻细菌的溶藻活性物质尚未被纯化和鉴定，这也限制了溶藻活性物质的进一步开发和应用。鄱阳湖位于长江中下游南岸，其流域面积的96.85%在江西境内，鄱阳湖汇纳流域内赣江、抚河、信江、饶河、修河五大河来水，经调蓄后，由湖口注入长江，其水系年均径流量约占长江流域年均径流量的16.3%“鄱阳湖在维护生物多样性，调蓄长江洪水以及长江中下游淡水供给等方面具有十分重要的作用，对维系区域和国家生态安全具有重要的战略意义”。近来，鄱阳湖水质受到严重的污染，水华现象经常发生。因此对于水华的治理刻不容缓。本实验，针对溶藻细菌的特

4、性进行研究。二、国内外研究方向及发展趋势国外已报道的溶藻细菌主要有交替假单胞菌、黄杆菌属、弧菌属、嗜胞菌属、腐生螺旋体属、粘细菌属和鞘氨醇单胞菌属等。我国华中师范大学的彭超等分离获得3株溶藻细菌，生理生化鉴定为葡萄球菌属、芽孢杆菌属和节杆菌属。目前，国内外溶藻细菌一般分离自发生水华或赤潮的海洋及湖泊，大多为革兰氏阴性菌，而且对溶藻细菌所作研究侧重于溶藻现象和溶藻方式，对溶藻细菌菌体浓度与溶藻作用之间的关系尚未涉及，菌株的鉴定也只限于生理生化试验。由于溶藻细菌在自然水体中存在的比率比较低，故采用传统的方法分离比较困难，需要浓缩大量水样，耗时且很难获得理想溶藻细菌，与将来工程实际应用相距甚

5、远。实际上，国内对溶藻细菌的研究仅处于起步阶段，在分子生物学水平上对溶藻细菌的研究尚未涉及。因此,寻找溶藻细菌分离源，实现短时间内分离筛选获得所需菌株，对溶藻细菌的深入研究及应用具有重要意义。三、研究内容及实验方案研究内容1、溶藻细菌的培养及分离2、溶藻细菌的溶藻方式实验方案1.材料与方法1.1材料1.1.1藻种及其培养选用的藻种为蓝藻中的铜绿微囊藻、水华鱼腥藻，均来源于中国科学院水生生物研究所藻种保藏中心。藻种经活化后，在23±0.5℃，光照强度为3000lx，光暗周期比14h：10h条件下培养。1.1.2培养基(1)肉膏蛋白陈液体培养基；(2)肉膏蛋白陈固体培养基：每100mL肉膏

6、蛋白陈液体培养基加入琼脂1.5~2.0g；(3)蓝藻培养基BG11；(4)制备两种蓝藻固体培养基，其中琼脂培养基和软琼脂培养基的琼脂含量分别为1.5%和0.8%。1.2方法1.2.1溶藻细茵的分离(1)细茵的初筛：从鄱阳湖中采回水样中，划线挑取菌落形态不同的菌种纯化，分别编号为L1~L20，转移到斜面培养基培养24~48h，用无菌水刷下制成菌液备用，同时用固体平板法计数；(2)利用液体感染筛选溶藻细菌：将扩大培养1周的水华鱼腥藻和铜绿微囊藻悬浊液，用蒸馏水调配至在680nm处吸光度值为0.5，取10mL移入20mL试管，再接种1mL菌液，混合均匀，同时设置空白对照。置光照培养箱培养8~

7、12d，在23±0.5℃，光照强度为3000lx，光暗周期比14h：10h条件下培养。每隔24h取样观察藻类的形态变化，如空白对照的蓝藻生长正常，而处理样黄化，取黄化藻液适度稀释，平板涂布，获得纯培养茵株，置蛋白胨培养基斜面保存；(3)利用固体感染分离溶藻细茵：以琼脂培养基作底层平板，将0.1mL菌液、5mL供试蓝藻和3mL熔化并冷却至47C的软琼脂培养基混合均匀迅速倾注到底层平板上，琼脂固化后进行培养，在23±0.5℃，光照强度为3000lx