葡萄炭疽病菌鉴定及同源性分析

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1、葡萄炭疽病菌鉴定及同源性分析刘丽刘长远王辉关天舒于舒怡李柏宏辽宁省农业科学院植物保护研究所为揭示葡萄炭疽病菌种类和遗传特征，给深入研宄该病提供科学理论依据。木研宄对不同地区的26株葡萄炭疽病菌通过形态学和rDNA-TTS序列分析进行鉴定及同源性研究。利用真菌通用引物HS4、HS5对病菌基因组进行PCR扩增，将测序结果与NCBI数据库上已知序列进行比对，同时利用Clustalx1.83和MEGA5.0软件进行聚类分析。结果表明:病菌菌落为白色或灰白色，菌丝呈绒状或絮状，分生孢子为圆柱形或圆筒状，单孢，无色;测得病菌ITS序列为500bp左右,

2、鉴定病原均为胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)o不冋地区葡萄炭疽菌的rDNA-ITS序列同源性高，亲缘关系比较近，但是各菌株间存在着遗传差异，并且菌株之间差异与地理来源和品种无明显的相关性。关键词：葡萄炭疽病;形态学鉴定;TTS序列测定;冋源性分析;通信地址：110161辽宁省沈阳市沈河区东陵路84号辽宁省农业科学院植物保护研宄所，Tel:024-88421256，0通信地址：110161辽宁省沈阳市沈河区东陵路84号辽宁省农业科学院植物保护研究所,Tel:024-88425875,。Identific

3、ationandHomologyAnalysisofColletotrichumgloeosporioidesinGrapeLiuLiLiuChangyuanWangHuiGuanTianshuYuShuyiLiBaihongInstituteofPlantProtection，LiaoningAcademyofAgriculturalSciences;Abstract：TheobjectivesaretoclarifyfungalspeciesandgeneticcharacteristicsofColletotrichumgloeosp

4、orioides,andprovidebasisforfurtherstudyingthisdisease.Theidentificationandhomologyanalysisof26strainsofC.gloeosporioidesfromdifferentdistrictswereconductedbymorphologyandrDNA-ITSsequcnceanalysis.PCRamplificationwasperformedwithfungaluniversalprimers1TS4and1TS5.Wecomparedth

5、esequenceswiththesequencesavailableinNCBI，andclusteranalysiswasconductedwithClustalx1.83andMEGA5.0software.Resultsindicatedthatcolonycolorwaswhiteorgreywhite,hyphaexhibitedvelvetorflocculent,conidiumshowedcylindricalshapeorcylindricshape，andwascolorless;ITSsequenceofpathog

6、enwasabout500bp,allidentifiedpathogenwereC.gloeosporioides.Althoughgrapeanthraxfromdifferentdistrictsexhibitedhighsequencehomologyandclosegeneticrelationship,differentstrainsshowedgenetiedifferencesandthisdifferencehadnoobviouscorrelationwithgeographicaloriginandvarieties.

7、Keyword：grapeanthracnose;morphologyidentification;ITSsequencing;homologyanalysis;0引言葡萄炭疽病是葡萄生产上的重耍病害，该病1891年在美国首次报道U1，目前，在全国大多葡萄栽培地区均有分布。该病每年均造成一定的产量损失，尤其是在多雨年份和潮湿地区易引发病害大流行，严重吋果园病穗率可达50%^70%£21，造成果实大量腐烂，严重减产。近年来，此病有明显加重趋势D1。李洋等U1针对辽宁省葡萄炭疽病进行了病原鉴定及药剂筛选等研宄，但对省内外各葡萄主产区系统调研该病

8、尚未见详细报道。因此对不同地区葡萄炭疽病菌鉴定和系统发育分析研究具有重要理论价值和实际意义。TTS序列是核糖体DNA上的一个非编码区域，具冇分化程度高、变异性强的特性,在微生物分