环氧氯丙烷预处理去细胞猪主动脉瓣防钙化作用实验研究

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1、环氧氯丙烷预处理去细胞猪主动脉瓣防钙化作用实验研究宿学家1张慧颖3易定华2魏旭峰2张志勇1（1解放军第88医院心胸外科山东泰安271000）（2第四军医大学丙京医院全军心血管病研究所心血管外科陕丙丙安710032）（3泰安军分区干休一所山东泰安271000）【摘要】目的观察去细胞过程及环氧氯丙烷预处理（EC）对猪主动脉瓣纤维结构的影响，探讨EC对去细胞猪主动脉瓣钙化的抑制作用。方法实验分为三组：新鲜瓣叶组（F组）：新鲜猪主动脉瓣未作任何处理。去细胞瓣叶（A组）：以胰酶消化，TrintonXIOO漂洗法去除瓣叶的细胞成分。EC预处理去细胞瓣叶（

2、E组）：以2%的EC/PBS溶液预处理去细胞猪主动脉瓣48h。以电子万能拉力计测定各组瓣叶的断裂强度。傅立叶变换红外光谱仪测定各组瓣叶的游离羧基、酰胺基团变化。原子吸收法测定SD幼年大鼠皮下埋藏8周后钙含量，vonkossa染色观察钙沉积。结果1、A组的断裂强度与F组比较没有明显的差异（619±98.9g/mm2vs632±89.8g/mm2p〉0.05）,E组较F组稍有增加I（799±37.4g/mm2vs619±98.9g/mm2p<0.05）。2、红外光谱图显示：F组瓣叶在1700

3、〜1750cm-l波长范围（游离羧基的特征性吸收光谱）内没有明显的吸收峰，A组吸收峰深大，而E组乂有明显的回落。在1600〜1650cm-l范围内（酰胺基的特征性光谱）F组吸收峰明显，A组吸收峰回落，E组吸收峰介入两者之间且较前两者均左移。3、体内埋藏2周后各组瓣叶钙含量开始增加，到达第六周时，新鲜瓣膜组钙含量有显著增加。去细胞瓣膜组增加缓慢，而经EC处理去细胞瓣膜组钙含量始终维持较低水平。4、vonkossa染色显示：F组瓣叶被破坏吸收，未见有新的细胞生长，有大量钙化斑存在。A组及E组瓣叶均可见大量的新细胞生长，前者仅出现散在的微小钙化灶，

4、后者未见有明显的钙化灶。结论去细胞后瓣叶的机械强度没有明显减低，游离狻基有明显的暴露，酰胺基团减少。经EC预处理可封闭游离羧基，增加酰胺基团含量，使瓣叶结构紧密，增加去细胞瓣叶的机械强度，具有减缓钙化的作用。【关键词】组织工程瓣去细胞钙化环氧氯丙烷【中图分类号】R966【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)12-0045-03Effectofacellularcaninevalvepretreatedwithepichlorohydrinonanti-calcificationSuXue-Jial,ZhangHui-yin

5、g3YiDing-Hua2,WeiXu-Feng2.ZhangZhi-yongll.DepartmentofCardio-ThoracicSurgeryof88Hospital,PLA.ShandongTaian,271000.2.DepartmentofCardiovascularSurgery,XijingHospital,ForthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an,710032.3N01SanatoriumofTai’anMilitarySubarea.ShandongTaian,2

6、71000【Abstract】AIM:Toobservetheeffectofacellularandpretreatedwithepichlorohydrin(EC)onstructureofcanineaorticvalvefibrinousscaffoldandinvestigatetheanti-cailcificationofEC.METHODS:Thisstudywasdividedthreegroups:Freshvalvegroup(F),thevalvewasnottreated.Acellularvalvegroup(A)

7、,thevalvewereacellularedbytrypsogenandTritonX100.AcellularvalvepretreatedwithECgroup(E),acellularvalvewaspretreatedwithEC/PBS48h.Fracturetensionwasmensuredbyomnipotentpulldynamometer.Freecarboxylandacyl-aminewretestedbyFourierinfraedspectrometer.Calcificcontentofvalveafteri

8、mplantedsubdermalwasmensuredbyatomicabsorbtionpectroscopy.Calcificaldepositionwaso