金针菇液体菌种活力检测的生物标记物研究

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1、生理生化2014（2）diblefungi金针菇液体菌种活力检测的生物标记物研究12，32，311*1聂荣荣邱运文黄湛林俊芳郭丽琼任姝阳（1华南农业大学食品学院，广东广州510642；2深圳市达利时实业有限公司，广东深圳518000；3广东达利时食用菌产业有限公司，广东深圳518000）摘要通过研究金针菇液体菌种培养过程中酶活力与菌丝活测培养基：玉米芯73%，麸皮25%，葡萄糖1%，石膏1%，料含力之间的对应关系，寻找一种能快速确定菌种活力的生物标记水量65%。物。试验检测了金针菇液体菌种在不同培养天数产生漆酶、淀供试试剂：愈创木酚购自天津市科密欧化学试剂有限公粉酶、蛋白

2、酶的酶活力与菌丝生长活力，结果表明漆酶可以作司；碘、酚酞指示剂、可溶性淀粉购自天津市精细化学品开发为金针菇液体菌种活力检测的生物标记物。有限公司；干酪素购自上海伯奥生物科技有限公司。关键词金针菇液体菌种漆酶淀粉酶蛋白酶1.2试验方法文章编号1000-8357（2014）02-0011-021.2.1PDA液体菌种的制备将活化好的金针菇1号固体菌近年来，金针菇液体菌种越来越被重视[1]。与传统的固种切成均匀的小块接种于PDA液体培养基中，置于25℃，转体菌种栽培模式相比，采用液体菌种具有生产周期短，菌龄速150r/min的摇床中震荡培养[6]。一致，萌发快，出菇齐，活力强，

3、污染率低等特点[2]。然而，液1.2.2金针菇液体菌种摇瓶培养及菌丝活力的检测按上体菌种的培养时间（即菌龄）影响接种的成败，培养时间过述4种配方配制摇瓶培养基，分装于250mL三角瓶中，每瓶装短，菌丝量不足，接种后菌丝吃料慢，发菌时间较长；培养时100mL，灭菌后分9d接种。每天取4种配方培养基各3瓶，间过长，菌丝细胞进入代谢物积累阶段，菌丝的生长活力下为3次重复，接种1.2.1中PDA液体菌种10%，置于25℃，转速降，接种后菌丝恢复生长慢，容易污染。目前对金针菇液体150r/min的摇床中培养，连接接种9d，第10天取出同时检测。菌种的研究多限于对培养基配方的优化及生

4、物量的研究，对取不同摇瓶天数的金针菇液体菌种500μL，接种于检测于各种不同的培养基，金针菇菌丝体在什么时间内其生长活培养基平板中间，25℃恒温培养2d，观察菌丝生长活力（包括力最强尚未见报道。气生菌丝旺盛度、菌丝致密度、菌落直径大小）。菌丝活力由生物标记物（biomarker）是生物状态的生物评定，能直接弱至强分5个等级，以①~⑤表示。或间接地反映生物机体细胞、生理、生化、行为、能量、分子或1.2.3金针菇液体菌种摇瓶过程中酶的活性检测代谢物水平的变化[3]。晁雷等人对研究结果表明，小麦叶片[7]1.2.3.1漆酶活性检测取不同培养天数的金针菇液体培中SOD酶活性有着作

5、为乙草胺污染土壤生物标记物的潜养液300μL分装于离心管中，加入等量的0.012mol/L的愈创力。Paolucci，M等研究发现拓朴异构酶活力可以作为小龙木酚溶液，摇匀观察结果。漆酶活性越强，检测液显色越深，虾生存能力的生物标记物[4]。金针菇液体菌种在培养过程中显色结果分5个等级，Ⅰ表示不显色，Ⅴ表示显色最深。产生多种酶，在菌丝不同的生长过程中，对应酶活力也会随1.2.3.2蛋白酶活性检测取不同培养天数的金针菇液体培之变化，有研究表明，纤维素酶，漆酶，淀粉酶活性高低可以养液100μL分装于离心管中，分别加入酪蛋白试剂30μL，反映菌株活性的强弱[5]。试验通过研究金针

6、菇液体菌种在不酚酞试剂100μL，0.2mol/L的NaOH溶液15μL，摇匀观察结同培养基上培养过程中的漆酶、淀粉酶、蛋白酶的活性变化果。蛋白酶活性越强，检测液显色越深，显色结果分5级，1+与菌丝活力强弱的对应关系，寻找一种能快速确定菌种活力表示不显色，5+表示显色最深。的生物标记物。1.2.3.3淀粉酶活性检测取不同培养天数的金针菇液体培养液400μL分装于离心管中，分别加入2%的可溶性淀粉溶1材料与方法液40μL，碘液20μL，摇匀观察结果。淀粉酶活性越强，检测1.1供试材料供试菌株：金针菇1号菌株（深圳市达利时液越透明，显色结果分5级，1#表示不变色，5#表示最透

7、明。实业有限公司提供）。供试摇瓶培养基：配方①玉米芯1.5%，2结果与分析玉米粉1.5%，麸皮1%；配方②玉米芯2%，玉米粉1%，酵母膏0.5%；配方③玉米芯1%，玉米粉2%，麸皮1%；配方④玉米芯2.1不同配方培养基不同培养天数金针菇菌丝生长活力的2%，玉米粉2%，麸皮1%。以上配方均加葡萄糖1%，KH2PO4比较分析4种配方培养基培养的金针菇液体菌种在不同0.1%，MgSO40.05%，CaCO30.02%，VB10.001%。菌种活力检培养天数的菌丝萌发能力不同，菌丝生长活力先增强后减弱（表1）。配方①、③、④中的液体菌