DB22T 1978-2013 野鲤种质鉴定 微卫星法

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1、ICS67.120.30B50备案号：40168-2014DB22吉林省本标准仅供内部使用不得翻印地方标准DB22/T1978—2013野鲤种质鉴定微卫星法IdentificationSpecificationsofWildCarpMicrosatellitesMethod本标准仅供内部使用不得翻印2013-12-18发布2013-12-31实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1978—2013本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标

2、准由吉林省水利厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省水产科学研究院。本标准主要起草人：郑伟、闫春梅、毛瑞鑫、陈伟强、王战蔚、王文兰、杜晓燕、李忠强、李秀颖、常淑芳、李永利。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1978—2013本标准仅供内部使用不得翻印野鲤种质鉴定微卫星法1范围本标准规定了利用微卫星法进行野鲤种质鉴定技术的试验方法。本标准适用于鲜活野鲤种质鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

3、改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。本标准仅供内部使用不得翻印3.1微卫星microsatelites又称短串联重复序列或简单重复序列（shorttandemrepeats，STRs；simplerepeats，SSRs），以2bp～6bp的短核苷酸序列为基本单位，呈串联重复状散在分布于生物体基因组中。3.2遗传距离geneticdistance衡量群体间若干性状综合遗传差异大小的指标。按多元统计分析方法计算品种间多个性状基因型值构成的多维空间的几何距离，就叫作群体间的遗传距离。主要的遗传距离分析方

4、法有：Nei氏标准遗传距离（Nei’sstandardgeneticdistance）。4原理微卫星由核心序列和两侧的侧翼序列所构成，侧翼序列使微卫星特异地定位于染色体某一部位，核心序列重复数的差异则形成微卫星高度的多态性。若某个体基因组中某个微卫星重复单位数相等，该个体在该座位的基因型为纯合子，否则为杂合子。检测方法是针对微卫星两端的侧翼序列设计引物，对模板DNA进行PCR扩增，根据结果判断个体基因型，进行统计分析。5试剂5.1除非另有说明，所用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682一级水的要求。1DB22/T1978—20135.2无水乙醇。5.3N,N

5、,N¢,N¢—四甲基乙二胺（TEMED）：4℃保存。5.4Taq本标准仅供内部使用不得翻印DNA聚合酶：-20℃保存。5.5分子量标准(Markers)：DL2000。5.6溴化乙锭（EB）。5.7琼脂糖。5.8Tris饱和酚。5.9300g/L丙烯酰胺溶液：20mL水中融解29g丙烯酰胺，1g甲叉双丙烯酰胺，定容至100mL，4℃保存。5.105×Tris硼酸(5×TBE)电泳缓冲液：Tris27g，硼酸13.75g，加蒸馏水400mL溶解后，加入0.5mol/LEDTA（pH8.0）10mL，补充蒸馏水定容至500mL。5.11100g/L过硫酸铵：8mL水中溶

6、解1g过硫酸铵，加水至10mL，4℃保存，现用现配。5.121g/L硝酸银（AgNO3）染色液：将AgNO30.5g溶于超纯水450mL，加ddH2O定容至500mL，棕色瓶中保存。5.13裂解液：5g/L十二烷基肌胺酸钠，10mmol/LEDTA（pH8.0），200μg/mL蛋白酶K。5.14显色液：将NaOH10g，无水Na2CO30.2g，甲醛2mL，溶解于适量蒸馏水中，并定容至500mL，现用现配。5.15提取液：Tris饱和酚+氯仿+异戊醇（25+24+1，体积比）。5.16乙醇溶液：乙醇+水（7+3，体积比）。5.17dN本标准仅供内部使用不得翻印TP

7、：四种脱氧核苷酸（4×dNTP）；保存条件为-20℃±2℃。5.18阳性对照品：30尾野鲤DNA提取物，用TE（pH8.0）溶解至50ng/µL，4℃保存备用。5.19阴性对照品：30尾建鲤DNA提取物，用TE（pH8.0）溶解至50ng/µL，4℃保存备用。5.20微卫星引物：参见附录A。6仪器6.1电子天平：精度0.0001g。6.2低温高速离心机：最大容量30×1.5ml，最高转速15,300rpm。6.3单道可调移液器：0.1-2.5μl，2-20μl，20-200μl，100-1000μl。6.4水浴恒温震荡器：温控范围RT-100℃，控温精度±1℃。