DB22T 1619-2012 牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱质谱法

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1、ICS67.050B04备案号：35747-2013DB22吉本标准仅供内部使用不得翻印林省地方标准DB22/T1619—2011牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法本标准仅供内部使用不得翻印DeterminationofClenbuterolresidueinthecowurine——HPLC-MS/MSmethod2012-12-01发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1619—2012本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009

2、和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：马书民、张勋、赵庆松、杨璐、胡婷婷、康明芹、王明泰、荣会。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1619—2012本标准仅供内部使用不得翻印牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了牛尿中盐酸克伦特罗残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于

3、本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理本标准仅供内部使用不得翻印本方法采用高氯酸溶液沉淀蛋白，氢氧化钠溶液调节pH值后，用乙酸乙酯萃取，样液经浓缩后过混合型阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1盐酸克伦特罗标准物质（CAS：37148-27-9）：纯度≥98.5%。4.2乙腈：色

4、谱纯。4.3乙酸乙酯：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5甲酸：色谱纯。4.6高氯酸：含量为70%～72%。4.7氨水:含量为25%～28%。4.8氢氧化钠。4.90.1mol/L高氯酸溶液：0.83mL高氯酸溶解于100mL水中，混匀备用。4.101mol/L氢氧化钠溶液：称取4gNaOH，溶于100mL水中，混匀备用。4.110.1%甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸（4.5），用水定容至1L，混匀后备用。4.1250%甲醇溶液（50+50）：50mL甲醇（4.4）与50mL水混匀。4.135%氨化甲醇（95+5）：95mL甲醇（4.4）与5mL氨水（

5、4.7）混匀。4.14标准储备溶液：准确称取适量的标准品，用甲醇(4.4)配制成100.0mg/L的标准贮备液，在0℃～4℃冰箱中保存。4.15标准工作溶液：根据需要用甲醇(4.4)稀释配制适当浓度的标准工作液，现用现配。4.16有机相微孔滤膜：0.22µm。1DB22/T1619—20124.17混合型阳离子交换固相萃取柱（MCX固相萃取柱）：60mg/3mL。使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化。本标准仅供内部使用不得翻印5仪器与设备5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。5.2氮吹仪。5.3旋转蒸发器。5.4天平：感量0.0

6、001g和0.01g。5.5涡旋混合器。5.6离心机：转速大于7000r/min。6分析步骤6.1提取取5mL样品（精确到0.1mL）于50mL离心管中，加入5mL高氯酸溶液（4.9）于涡旋混合器上充分混合，用1mol/LNaOH溶液调节溶液的pH值至9.5±0.1，加入20mL乙酸乙酯，涡旋振荡混匀。4℃条件下10000r/min离心5min，重复提取三次，合并乙酸乙酯相，放入浓缩瓶中，35℃旋至近干，用5mL0.1%甲酸本标准仅供内部使用不得翻印溶液(4.11)定容，待净化。6.2净化将上述样液过MCX柱净化，依次用5mL甲醇（4.4）、5mL

7、水和5mL0.1%甲酸水溶液(4.11)对柱子进行预处理，将样品溶解液以1.0mL/min的流速加载在MCX（4.17）小柱上，再依次用5mL0.1%甲酸溶液、5mL水、5mL50%甲醇(4.12)洗柱，弃去淋洗液；真空抽干MCX柱2min，用5mL5%氨化甲醇（4.13）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在45℃下氮气流吹干，加入1mL乙腈：0.1%甲酸溶液（30:70）溶解残渣，过0.22µm滤膜，进行HPLC-MS/MS测定分析。6.3空白试验除不称取试样外，均按6.1和6.2进行。6.4测定6.4.1色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱：C1

8、8柱，150mm×2.1mm(i.d)，3.5μm或相当者；b)流动相：乙腈-0.1%甲酸水（30+70）；c)流速：0.