绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌

《绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、２０１３，３９（５）：１２８－１３３ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌徐明，桂月晶，祁伟彦，柳少燕，陈捷胤，戴小枫＊（中国农业科学院农产品加工研究所，北京１００１９３）摘要以携带有潮霉素抗性筛选标记的ｐＣＴＨｙｇ载体为骨架，构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因ｓＧＦＰ的载体ｐＣＨ－ｓＧＦＰ，并通过农杆菌介导的遗传转化法导入引起棉花黄萎病的高致病力大丽轮枝菌Ｖｄ９９１，获得了ｓＧＦＰ整合到大丽轮枝菌基因组的转化株。通过转化子荧光信号、生长表型和致病力筛选鉴定，获得了１株与Ｖｄ９９１生长和致病力无显著差异且荧光信号强烈的转化株Ｖｄ－ｇｆｐ７７。

2、侵染棉花根部试验表明，Ｖｄ－ｇｆｐ７７侵染棉花后快速扩展繁殖，子代仍然能发出强烈的荧光信号。本试验绿色荧光蛋白标记大丽轮枝菌的成功构建，为后续大丽轮枝菌侵染棉花过程的组织学和致病机理研究提供了良好的研究材料。关键词大丽轮枝菌；绿色荧光蛋白；农杆菌介导法；激发荧光中图分类号：Ｓ４３５．６２１．２文献标识码：ＡＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－１５４２．２０１３．０５．０１８ＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅＸｕＭｉｎｇ，ＧｕｉＹｕｅｊｉｎｇ，ＱｉＷｅｉｙａｎ，ＬｉｕＳｈａｏ

3、ｙａｎ，ＣｈｅｎＪｉｅｙｉｎ，ＤａｉＸｉａｏｆｅｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏ－ＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｐＣＨ－Ｓｇｆｐｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ（ｓＧＦＰ）ｉｎｔｏｔｈｅｐＣＴＨｙｇｖｅｃｔｏｒｗｉｔｈｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ－ｒｅ

4、ｓｉｓｉｔａｎｔｇｅｎｅ，ａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅｓｔｒａｉｎＶｄ９９１ｈｉｇｈｌｙｖｉｒｕｌｅｎｔｔｏｃｏｔｔｏｎｂｙＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ａｔｒａｎｓ－ｆｏｒｍａｎｔｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，ｎａｍｅｌｙｓｔｒａｉｎＶｄ－ｇｆｐ７７，ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ，ｗｈｉｃｈｈａｄｔｈｅｓａｍｅｇｒｏｗｔｈｐｈｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｖｉｒｕｌｅｎｃｅｗｉｔｈｔｈｅｗｉｌｄｔｙｐｅ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉ

5、ｍｅｎｔｏｆＶｄ－ｇｆｐ７７ｔｏｃｏｔｔｏｎｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｒａｉｎＶｄ－ｇｆｐ７７ｃａｎｅｘｃｉｔｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｆｔｅｒｉｎｖａｄｉｎｇａｎｄｓｐｒｅａｄｉｎｇｉｎｃｏｔｔｏｎｔｉｓｓｕｅ．ＴｈｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＧＦＰ－ｔａｇｇｅｄｉｓｏｌａｔｅｏｆＶ．ｄａｈｌｉａｅｉｓｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｔｏｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｎｆｅｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｔｏｃｏｔｔｏｎａｎｄｉｔｓｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ；ｇ

6、ｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＰ）；Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｅｘｃｉｔｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ大丽轮枝菌（ＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅＫｌｅｂ．）是引ｔｅｓ）、黑痣菌目（Ｐｈｙｌｌａｃｈｏｒａｌｅｓ）、丛梗孢科（Ｍｏｎｉｌｉ－［４］起棉花黄萎病的主要病原菌，可导致棉花叶片变黄ａｃｅａｅ）、轮枝菌属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）。野生型大丽轮萎蔫甚至枯死，给棉花生产带来了巨大的经济损失。枝菌在马铃薯葡萄糖培养基上的培养性状为圆形菌我国棉花黄萎病尤为严重，已经成为棉

7、花生产上第落，产生白色菌丝、大量黑色微菌核的黑色菌落或者一大病害，尤其是１９９３、１９９５、１９９６和２００３年的大介于两者之间的中间形态，培养型和菌株的致病力［１－３］［６－７］暴发，导致棉田损失惨重，严重的田块甚至绝收。无显著关联。它同时还危害番茄、茄子、辣椒、黄瓜、莴苣等２００多绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ，种主要经济作物，是典型的土传性维管束真菌病ＧＦＰ）大量应用于多种细菌、真菌、植物和哺乳动物［４－５］［８］害。大丽轮枝菌是一种丝状真菌，分类学上属于细胞的研究，其表达不需要任何外源底物或辅助子囊菌门（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ

8、）、粪壳菌