河豚毒素的快速检测技术

《河豚毒素的快速检测技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、—234—江苏农业科学2014年第42卷第5期赵静，陶宁萍，卢瑛，等．河豚毒素的快速检测技术［J］．江苏农业科学，2014，42(5):234－237．河豚毒素的快速检测技术1111，2赵静，陶宁萍，卢瑛，丛健(1．上海海洋大学食品学院，上海201306;2．上海市食品研究所，上海200235)摘要:为建立快速、简便、适用于河豚毒素免疫分析检测技术的前处理方法，通过采用不同体积分数的三氯乙酸对河豚鱼样品进行前处理，采用市售的酶联免疫(ELISA)试剂盒及由笔者所在实验室制备的以磁性纳米探针为标记物的免疫层析(LFIA)试纸条的检测结果作为前处理方法优劣的判

2、断依据。试验结果表明，经2%乙酸对样品进行2次加热提取后，采用体积分数为10%的三氯乙酸对样品中的蛋白进行沉淀，待测样品适用于ELISA试剂盒及LFIA试纸条检测。关键词:三氯乙酸;河豚毒素;酶联免疫;免疫层析;检测技术中图分类号:TS254．7文献标志码:A文章编号:1002－1302(2014)05－0234－04河豚毒素(tetrodontidae，TTX)是一种毒性强、分子量低测河豚毒素的最大优势在于检测时间短，具备潜在的快速检+的非蛋白类神经毒素，为典型的Na通道抑制剂，分子结构为测、现场检测的特点;但当与之相配套的前处理过程步骤相对氨基全氢喹唑

3、啉化合物，分子式为C11H17N3O8，相对分子量为繁琐、耗时长时，整个检测的快捷性就无法显现出来，更无法319，该分子中含有原酸酯结构，几乎所有的碳原子均具不对实现现场快速检测。因此，本研究对常规的IA前处理方法进称取代。它微溶于水和浓酸，极易溶于醋酸溶液，不溶于有机行了全面调整，提高了去除杂蛋白、脂肪的能力，简化了前处溶剂，纯品为无色无臭针状固体结晶，易被碱还原。TTX非常理步骤，节省了前处理时间，提高了IA的效率和准确性，提升稳定，在日光下曝晒20d或在盐水中腌30d后，其毒性仍不了方法的稳定性并提出了适用于河豚肌肉的前处理方法，结能被全部破坏，只有

4、在高温下加热30min以上或在碱性条件果令人满意。［1］下才能被分解。河豚因其肉质鲜美、营养丰富，深受人们1材料与方法的喜爱，但河豚体内所含有的河豚毒素化学性质稳定，一般烹调手段难以破坏，导致因食用河豚而中毒的事件屡有发生，又1．1试验材料与试剂因中毒后缺乏有效的解救措施，使得“拼死吃河豚”成为了现纯度为95．0%的TTX标准品，购自河北省水产研究所;实，严重威胁人们的生命安全。随着食品安全问题逐渐被人乙酸、三氯乙酸(TCA)、氢氧化钠等试剂均为分析纯，购自国［2］们关注，快速、高效的河豚毒素检测方法也得以发展。近药集团;ELISA试剂盒购自北京中卫食品卫

5、生科技有限公司;［3］年来，河豚毒素的免疫分析检测技术(immunoassay，IA)因卡槽(MICTtestcassette)、磁性纳米微球(200nmmagnetic其灵敏度高和操作简便等受到科研人员的青睐，例如，酶联免particles)，购自Quantum量子科学仪器贸易有限公司;试验样疫(ELISA)试剂盒法、基于磁性纳米探针免疫层析检测技本为由上海市水产研究所提供的人工养殖暗纹东方鲀(雌、［4－5］术等。虽然这些检测技术具有快速、简便等优点，但是对雄)及菊黄东方鲀(雌、雄)。样品前处理要求较高，样品前处理的效果直接影响检测结果1．2试验仪器与设

6、备的准确性，可以说是整个检测过程中的关键。目前常用的前TDL－50B台式离心机购自Anke公司;BiotekSynergy2处理方法存在着一些问题:首先，河豚毒素极易与杂蛋白吸多功能酶标仪购自芯起点基因科技(北京)有限公司;MAＲ附，同时样品中的杂蛋白、脂肪在检测时会干扰河豚毒素与抗磁信号分析系统购自美国MagnaBioSciences公司。体的结合，可能还会与参与免疫检测的抗原或抗体发生非特1．3样品前处理方法异性结合，从而影响试验结果的准确性。因此，在前处理过程1．3．1ELISA试剂盒前处理方法ELISA试剂盒采用固相中，如何去除样本中的杂蛋白、脂肪

7、等杂质值得深入研究。其酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。将待次，常规前处理方法如国标高效液相色谱的前处理方法虽能测河豚组织用剪刀剪碎后磨成糜状，加入5倍体积0．1%乙很好地去除杂质，但是其过程相对较繁琐且费时费力。IA检酸溶液(即5g组织中加入0．1%乙酸溶液25mL，下同)，于离心管中水浴煮沸10min;上清用快速定性滤纸过滤于50mL离心管中，沉淀部分再加入0．1%乙酸溶液20mL，水收稿日期:2013－09－30浴煮沸3min，冷却至室温后，所有的液体及煮沸的样品都加基金项目:上海市科学技术委员会工程中心建设项目(编号:到离心管中，

8、3000r/min离心10min;取上清，量体积，置分11DZ22