一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(13):3784－3786责任编辑刘月娟责任校对李岩一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定123*鞠守勇，曹志林，李金山(1．武汉职业技术学院生物工程学院，湖北武汉430074;2．河南工程学院资源与环境学院，河南郑州451191;3．华中农业大学生命科学技术学院，湖北武汉430070)摘要［目的］筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌。［方法］筛选芽胞杆菌，显微镜观察其菌落形态，生理生化鉴定，测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力。［结果］筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023。该菌最高酶活力可以达263

2、．38IU/ml。［结论］筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023，为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础。关键词纳豆激酶;芽胞杆菌;分离中图分类号S182文献标识码A文章编号0517－6611(2014)13－03784－03IsolationandIdentificationofaBacillusStrainProducingNattokinaseJUShou-yong，LIJin-shanetal(SchoolofBioengineering，WuhanInstituteofTechnology，Wuhan，Hubei430074;Colleg

3、eofLifeSci-enceandTechnology，HuazhongAgriculturalUnivesity，Wuhan，Hubei430070)Abstract［Objective］TheresearchaimedtoisolateandidentifyaBacillusstrainproducingNattokinase．［Method］IsolatedBacillusstrain，observeditscolonymorphology，measureditsgrowthcurveandenzymeactivityofNattokinaseprodu

4、cedbythestrain［Ｒesult］Isolationandiden-tificationofaBacillusstrainproducedNattokinase，namedZD023．Itshighestenzymeactivitywas263．38IU/ml．［Conclusion］Isolationandi-dentificationofaBacillusnattoZD023couldprovidethefoundationforthedevelopmentoffunctionalfoodordrugswiththrombolyticacitivi

5、ty．KeywordsNattokinase;Bacillus;Isolation血栓疾病是一类严重危害人类健康和生命的疾病，包括1．1．3试剂。纤维蛋白原、凝血酶、尿激酶、巴比妥钠均购［1］心血栓、脑血栓、肺栓塞和末梢动静脉血栓等常见疾病。随自中国药品生物制品检定所。着我国人们生活水平的提高，膳食中高脂肪、高蛋白被过量摄1．2方法取，血栓性疾病已超过癌症和糖尿病成为第一大健康杀手，每1．2．1芽胞杆菌分离方法。称取1．0g土样，放入100mlLB［1］年约有350万人死于心血管病，占总死亡原因的41%。因液体培养基，加入一定数量的灭菌玻璃珠，充分混匀，75℃水

6、此，研究开发治疗血栓性疾病的药物一直是医学上的热点。浴10min，静置30min，离心，取1ml上清液梯度稀释，选取［2］－2－3－41987年须见洋行博士首先发现了溶解血栓的生物武10、10和103个稀释度，涂布ICPM固体培养基上，28℃［3，7－8］器———纳豆激酶(Nattokinase，NK)。它是由纳豆芽胞杆菌培养48h，石炭酸复红染色，100倍油镜镜检观察芽胞。(Bacillusnatto)产生的一种具有纤溶活性的中性丝氨酸蛋白1．2．2菌株生理生化鉴定。采用枯草芽胞杆菌标准菌株酶。它可用于治疗和预防血栓病，通过口服直接溶解血栓，Bacilluss

7、ubtilis168(B．s168)作对照，对得到的细菌进行生［3］被认为是一种非常有前途的溶血栓和抗血栓药物。由于纳理生化鉴定。豆激酶的优点，近年围绕纳豆激酶生产菌株筛选的工作方兴1．2．316SrＲNA基因序列分析。通用引物采用27F未艾。该研究从湖北武汉市土壤中筛选到一株产纳豆激酶(AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)和1492Ｒ(TACGYTACCTT-的纳豆芽胞杆菌ZD023，研究了菌落形态，进行生理生化鉴GTTACGA-CT)，PCＲ扩增产物使用浓度1．5%琼脂糖凝胶电定及16SrＲNA基因比对，采用纤维蛋白平板法测定了其产泳检测，送于北京奥科

8、生物技术公司测序，测序结