3_hsd单克隆抗体的制备及其鉴定

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1、天津农业科学TianjinAgriculturalSciences2014，20（5）：31-35植物生理与生物技术3α-HSD单克隆抗体的制备及其鉴定杨伟克，吴兴海，王建华（山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，山东青岛266002）摘要：为制备抗3α-HSD蛋白单克隆抗体(MAb)，以已表达纯化的高纯度3α-HSD蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术，经过免疫和细胞融合后筛选出特异性的抗3α-HSD蛋白单克隆抗体,成功冻存35株IgG类型阳性杂交瘤细胞株。对14号和20号Anti-3α-HSD进行亲和性测试，发现其与可溶性抗原蛋白的亲和常数分别为3.7E+09和4.2E+

2、09，二者可与抗原牢固结合，具有良好的亲和性。关键词：3α-HSD；单克隆抗体；制备；鉴定中图分类号：R392.11文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2014.05.0074DevelopmentandIdentificationofMonoclonalAntibodyAgainst3α-HSDYANGWei-ke,WUXing-hai,WANGJian-hua(InspectionandQuarantineCenter,ShandongExitandEntryInspectionandQuarantineBureau,Qingdao,Shando

3、ng266002,China)Abstract:Fordevelopmentofmonoclonalantibody(MAbs)against3α-HSD,BALB/cmicewereimmunizedwithasynthesized3α-HSD.Thesplenocytesoftheimmunizedmicewerefusedwithsp2/0cells，andthepositivehybridomacellswerescreened.35ofMAbswereidentifiedasIgGandsuccessfullycryopresevated,theaffinityconstanto

4、f14#and20#MAbsagainst3α-HSDwere3.7E+09and4.2E+09.TheaffinityofMAbswasgood.Keywords:3α-HSD;monoclonalantibody(MAbs);development;identification睾丸酮丛毛单胞菌在含有类固醇的培养基上实现对环境或食品饲料样品中睾丸酮或类固醇类或环境中存在类固醇底物诱导时，可产生多种类激素的准确定性以及定量检测。研制3α-HSD单固醇脱氢酶和11种降解酶，其中3α-HSD(3α-克隆抗体，可推动这种新型甾体激素检测方法更hydroxysteroiddehydrogenase

5、,3α-HSD)是一种能够为广泛地用于监测环境中甾体激素污染的整体情利用分解甾体类和多环芳烃类化合物来获取菌体况，以及食物、饲料中类固醇类有害成分的快速初生长所需要的碳源和能源的关键酶。3α-HSD的筛。目前，国内外尚无针对睾丸酮丛毛单胞菌3α-中文全称是3α羟基类固醇脱氢酶，目前认为，HSD酶蛋白单克隆抗体制备的报道，本研究利用3α-HSD不仅是睾丸酮丛毛单胞菌在以类固醇为已表达纯化的高纯度3α-HSD蛋白，通过免疫技唯一碳源时产生的一种醇脱氢酶，也是降解类固术和细胞融合技术，制备其单克隆抗体，为建立甾醇的关键酶，广泛地存在于原核和真核生物体内，体类激素的快速检测方法及睾丸酮丛毛单胞菌降

6、[1-4]是人体调节性激素代谢水平的重要物质。解类固醇类物质的机理研究奠定基础。在睾丸酮丛毛单胞菌降解甾醇类化合物类固醇的过程中，随着甾体类激素等诱导剂浓度的提1材料和方法高，3α-HSD的翻译表达量相应提高，在一定范围[5]内与甾体类激素含量形成了线性关系。基于这1.1试验材料与试剂种间接的线性关系，可利用3α-HSD单克隆抗体，IMDM培养基、IMDM完全培养基（含15%血收稿日期:2013-12-23；修订日期:2014-03-10基金项目：质检公益性行业科研专项（201110018-04）;质检总局专项（2013IK173、2013IK293）作者简介：杨伟克（1981—），男，山

7、东青岛人，兽医师，硕士，主要从事进出品食品验检工作。通讯作者为吴兴海。·32·天津农业科学第20卷清）、新生牛血清为实验室保存；2.2%甲基纤维素清，用无血清的IMDM将细胞小心轻柔地吹匀，离-1（货号：M0262-100G）、HAT（货号：H0262-10V）、心（1500r·min，5min）。将离心好的细胞上清尽HT（货号：H0137-10VL）购自SIGMA公司；量倒掉。拍打离心管底以充分悬浮细胞，将离心管PEG