亲水支架细胞培养的染色方法.pdf

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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn#亲水支架细胞培养的染色方法**皮彦斌，孟庆阳，敖英芳（北京大学第三医院运动医学研究所，北京，1000191）5摘要：目的：发现一种检测亲水支架上细胞培养状态的方法。方法：将待检测细胞接种到亲水支架上进行培养，至待检测细胞在亲水支架上的生长融合率为90%-95%时，获得支架-细胞复合体系。采用吖啶橙染色液对支架-细胞复合体系进行荧光染色，并采用磷酸缓冲盐溶液对染色后的支架-细胞复合体系进行洗涤。将洗涤后的支架-细胞复合体系置于激光扫描共聚焦显微镜下，并利用绿色荧光通道和橙色荧光通道进行观10察，从而检测得到亲水支架上细胞的培养状态。

2、结果：通过这种方法，激光共聚焦显微镜下的细胞分布情况显示十分清晰，不存在亲水支架对荧光染色液的吸附所造成的干扰，使得细胞的分布及生长状态的分析更加直观及准确。结论：本研究提供的方法能够清晰、准确地检测亲水支架上细胞的分布情况及生长状态，可以对亲水支架上的细胞进行无损、实时、动态地检测。且操作简便，便于规模化推广应用。关键词：吖啶橙染色，激光共聚焦显微镜，亲水支架15中图分类号：Q813.1+1AmethodtodetectcellularculturestateonthehydrophilicscaffoldPIYanbin,MENGQingyang,AOYingfang20(Institut

3、eofSportsMedicine,PekingUniversityThirdHospital,Beijing,1000191)Abstract:Purpose:inpresentstudy,amethodwasintroducedfordetectingthestateofcellsculturedonthehydrophilicscaffold.Methods:stemcellswereculturedonahydrophilicscaffoldtobuildacell-scaffoldcomplexwithaconfluenceof90-95%.Thefluorescencestaini

4、ngofcell-scaffoldcomplexwasproducedbyacridineorangestaining,andrinsedbyphosphatebuffersolution(PBS)toerasethe25overdoesacridineorangefluorescencedyes.Afterfluorescentstaining,thecell-scaffoldcomplexwasobservedundergreenandorangechannelsofconfocalfluorescencemicroscope.Result:thestateofculturedcellsc

5、ouldbedisplayedclearlyandpreciselywithouttheinterferenceofunintendedstainingonhydrophilicscaffold..Conclusion:bythismethod,Thedistributionandgrowthstateofcellonthescaffoldcanbemeasuredeasily.30Keywords:Acridineorangefluorescencedyes;Confocalfluorescencemicroscope;Hydrophilicscaffold0引言35组织工程支架是一种用于修

6、复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物，它可以为细胞的生长输送营养及排泄代谢产物，并为细胞的增殖和分化提供结构支撑和空间。为了获知组织工程支架的作用效果，在利用组织工程支架进行细胞培养时，需要对组织工程支架上所培养细胞的分布、生长和增殖等培养状态进行检测。因此，有必要提供一种简单易行、清晰准确的检测组织工程支架上细胞培养状态的方法。目前，现有技术40通常采用荧光染料对细胞中的某些特定成分（如DNA、RNA等）进行标记，通过激光扫描共聚焦显微镜对细胞中荧光标记的特定成分发出的荧光进行观测，从而了解细胞在组织工程支架上分布、生长和增殖情况。但是，现有技术至少存在以下问题：当

7、组织工程支架为亲水性基金项目：教育部新教师基金（20130001120101）作者简介：皮彦斌（1979年-），男，主治医师/助理研究员，运动创伤，软骨组织工程通信联系人：敖英芳（1958年-），男性，教授，博导，关节运动创伤，软骨组织工程.E-mail:aoyingfang@163.com-1-中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn时，其非特异性吸附荧光染料，造成亲水性组