2 o2 处理大块牛松质骨后成分分析

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1、2O2处理大块牛松质骨后成分分析　　摘要:目的研究大块牛松质骨（MBCB）处理后的各种成分及高浓度H2O2消除异种骨抗原性的机制.方法采用干燥失重法及残渣法检测经过系统去抗原处理后的大块异种骨的有机、无机质及水份含量;将25块大块新鲜牛松质骨均分为5组，分别用高浓度H2O2浸泡0，24，48，72和96h，采用氨基酸分析方法研究不同H2O2处理时间的骨块中羟脯氨酸、脯氨酸含量.结果经处理后，MBCB为色白，并呈现出多孔样结构，扫描电镜观察，松质骨呈清晰的多孔结构，孔壁光滑;5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸的含量随着H2O2处理时间的延长均有同

2、步下降的趋势，但各组间无显著性差异（P>0.05）;5组检测样品中18种氨基酸含量及氨基酸总量随着H2O2处理时间的延长亦有同步下降的趋势，仅0h与96h组间18种氨基酸以及总氨基酸含量有显著性差异（P<0.05），其余各组间无显著性差异（P>0.05）;5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸在总氨基酸总量所占比例随着H2O2处理时间的延长无明显变化，各组间无显著性差异（P>0.05）.结论大块异种骨经系统去抗原处理后，保持了一定的有机及无机质比例，既具有良好的力学特性又消除了其抗原性，提示高氧化剂引起蛋白质变性是消除大块异

3、种骨抗原性的主要原因.　　Keyinoacidanalysis;-ponent，heterologous　　Abstract:AIMToanalysetheponentsofantigen-elimi-natedmassivebovinecancellousbone（MBCB）andtostudythemechanismofhighconH2O2eliminatingtheantigenici-tyofxenogenicbone.METHODSDry-ethodeasuretheorganic，mineral，andassivefleshb

4、ovinecancellousboneblocksL・L-1conH2O2for0，24，48，72，96h.Thequan-titiesofhydroxyprolineandprolineinthefivegroupseasuredbyaminoacidanalysis.RESULTSAftertheanti-geneliminatingprogram，MBCBoccurredasetreatedinhighconH2O2inthefivegroups，butnodiffer-encesbetedecreas-ingtend

5、encyinoacidsoftheboneblocksinthefivegroups;differenceinoacidsaycontainreasonablerateoforganicandminer-almaterial，echanicprop-ertyofMBCBafteritsantigen-eliminatingprogram.Denatu-ralizationofproteinintheconditionofoxidationofhighcon-H2O2ajormechanismtoeliminatetheanti-genici

6、tyofmassivexenogenicbone.　　0引言　　在以往颗粒型异种松质骨处理与应用的基础上［1］，为了更广泛地应用大块异种骨修复四肢大节段骨缺损，我们对高浓度H2O2去抗原处理异种骨的机制进行研究，同时对异种骨经去抗原处理后的成分进行分析，为异种骨块的临床应用提供实验基础.　　1材料和方法　　1.1材料　　新鲜牛肱骨上端松质骨.　　1.2方法　　大块去抗原牛松质骨（antigen-extractedmassivebovinecancellousbone，MBCB）选取新鲜牛肱骨上端松质骨，截取15mm×20mm×30mm形状规

7、则长方体骨块，用50℃压力水反复冲洗，沥干;50℃下1∶1氯仿甲醇脱脂24h;50℃下300mL・L-1H2O2浸泡24h;重复步骤2次，脱脂共24h×3，H2O2处理24h×3;双蒸水透析12h×2;0.3mol・L-1的HCl内脱钙处理5min，双蒸水反复冲洗至pH6.0;冷冻干燥，密封包装.　　1.2.1MBCB的扫描电镜SEM观察　　4mm大小的电镜样品分别取材于新鲜牛松质骨及MBCB，多聚甲醛固定，锇酸及乙晴处理，真空镀膜，扫描电镜观察.　　1.2.2MBCB的成分检测　　参照《中华人民共和国药典》19

8、95版，干燥失重法及残渣法.检测步骤:取相同小坩锅4个，置80℃烘烤24h，蒸发坩锅内水分;选取密封的MBCB冻干骨4块，编号A，B，C，D，分别准确称质量（m），再分别放入坩锅