不同种类蔬菜sod提取和活性比较.花亦洁2

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1、生物化学实验（甲）自主实验（微型研究课题）设计与实践生物化学实验（甲）自主实验（微型研究课题）设计与实践不同种类蔬菜SOD提取和活性比较花亦洁308000500610不同种类蔬菜SOD提取和活性比较生物化学实验（甲）自主实验（微型研究课题）设计与实践一、实验背景和目的　超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase,EC1.15.1.1,SOD）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果从1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧

2、化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。生物体在长期的生命活动中,总会由于环境因素或生理条件的变化而出现氧自由基增加，抗氧化能力下降的情况，并由此引发一些疾病，如脂质过氧化与膜疾病、肿瘤、衰老、心血管疾病、创伤

3、、辐射损伤、高度中毒等有关。SOD作为生物体内一种重要的抗氧化剂，起着非常重要的作用。同时，SOD还可以作为一种添加剂，添加到化妆品和食品中，在预防和治疗由于自由基增多而引起的一系列疾病方面起到一定作用。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成，由此可见SOD的重要性。本实验希望通过测定得到四种常见蔬菜中的SOD含量，从而可以对日常饮食做出一定指导。同时希望通过此次自主实验，进一步熟悉生物化学实验的设计方法、学习SOD定量检测方法并提高自身实验操作能力。二、实验原理超氧化物歧化酶（E1.

4、15.1.1）（SuperoxideDismutase,SOD）是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的金属酶。它催化超氧化物阴离子自由基（O2-）发生歧化反应，从而消除自由基：M(n+1)+−SOD+O2−→Mn+−SOD+O2Mn+−SOD+O2−+2H+→M(n+1)+−SOD+H2O2.其中M=Cu(n=1)、Mn(n=2)、Fe(n=2)、Ni(n=2).SOD在维持生物体内超氧阴离子自由基产生与消除的动态平衡中起着重要作用。邻苯三酚自氧化：经典的邻苯三酚自氧化法是Marklund等于1974年发表的一种通过

5、比色测定SOD的简便方法。邻苯三酚自氧化过程为链式反应，可产生O2-，生成有色的中间产物，吸光度随之增加，可用分光光度计检测。在pH<9.0时，邻苯三酚自氧化速率与生成的O2-的浓度呈正相关。SOD加入后，催化超氧化物阴离子生成过氧化氢，使有色中间产物的生成受阻，导致吸光度下降，邻苯三酚自氧化速率降低。故可通过紫外可见光分光光度仪来定量测定SOD在体系中对O2-的清除作用，间接评价其抗氧化能力。10不同种类蔬菜SOD提取和活性比较生物化学实验（甲）自主实验（微型研究课题）设计与实践主要反应如下：本实验中用逐差法计算邻

6、苯三酚平均自氧化速率：酶活性单位采用抑制邻苯三酚光化还原50%为一个酶活性单位表示：三、实验器材与仪器试管15cm;精确pH试纸;研钵;纱布;漏斗;玻棒;量筒；容量瓶；移液管（5ml）；移液枪（1000μl）BeckmanCoulter的Avanti™CentrifugeJ-25;50mL离心管北京普新通用仪器有限责任公司产的TU-1800紫外可见光光度计60℃、25℃水浴锅四、实验材料与试剂实验材料：新鲜莴苣、红果番茄、芹菜、韭黄实验试剂：1、0.05mol/LpH7.82、0.1mol/LTris-HCl(pH8

7、.2内含2mmol/LEDTA)3、60mmol/L邻苯三酚4、石英砂5、氯仿10不同种类蔬菜SOD提取和活性比较生物化学实验（甲）自主实验（微型研究课题）设计与实践6、乙醇7、二次蒸馏水五、实验操作方法和步骤试剂的配制：1、0.05mol/LpH7.8磷酸缓冲液（1）0.2mol/L的Na2HPO4；称取NaH2PO4.2H2O固体0.78g用重蒸水定容至25ml。（2）0.2mol/L的Na2HPO4：称取Na2HPO4.12H2O固体1.7908g用重蒸水定容至25ml。（3）0.2mol/LpH7.4的PB的

8、配制：取5.9ml0.2mol/L的NaH2PO4溶液和25ml0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O溶液,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。（理论比为19：81）。取2.5ml上述溶液于100ml容量瓶定容得0.05mol/L磷酸缓冲液用一定浓度NaOH溶液调节pH至7.8即得。2、0.1mol/LTris-