ABA信号转导中OsUGD与OsDMI3相互作用的鉴定.pdf

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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnABA信号转导中OsUGD与OsDMI3相互作用#的鉴定**李溪，蒋明义，倪岚5（南京农业大学，生命科学学院，南京，210095）摘要：本研究前期以OsDMI3为诱饵，利用酵母双杂筛选水稻叶片cDNA文库，筛选出一个与OsDMI3互作的蛋白，OsUGD。为了进一步检测OsDMI3和OsUGD互作的真实性，运用BiFC（BimolecularFluorescenceComplementation），GST-pulldown，Co-IP（Co-Immunoprecipitation）共同来验证OsDMI3和OsUDG的互作。实

2、验表明OsDMI3和OsUGD不管在体内还是体外均存在相互作用。用荧光定量PCR检测水稻叶片中10OsUGD的表达，发现OsUGD表达量在外源ABA处理60min时出现峰值，确定OsUGD受ABA诱导上调。上述结果为进一步鉴定ABA信号途径中OsDMI3下游靶蛋白并阐明相关信号通路奠定了基础。关键词：OsDMI3；ABA信号；OsUGD中图分类号：Q945.78IdenficationofOsUGDInteractingwithOsDMI3inABA15signalingLIXi,JINGMingyi,NILan(NanJingAgriculturalUniversity,Colle

3、geofLifeScience,NanJing,210095)Abstract:Inthisproject,basedonourpreviousstudiesforthisproject,weidentifyanewinteractingproteinofOsDMI3,OsUGD.ToverifytheinteractionbetweenOsUGDandOsDMI3,weusedBiFC20(BimolecularFluorescenceComplementation)assay,GST-pulldownassayandCo-IP(Co-Immunoprecipitation)ass

4、aystotest.TheresultrevealedthatOsUGDandOsDMI3didinteractwitheachotherinvitroandinvivo.ToinvestigatetheeffectsofABAtreatmentsontheexpressionofOsUGDgeneinleavesofriceseedlings,relativequantitativereal-timePCRanalysiswasused.ThemaximumincreaseofOsUGDappearedat60minafterABAtreatment.Theseresultswil

5、lestablishthe25foundationforfurtherstudyingtheinteractingproteinofOsDMI3andunderstandingofmechanismofOsDMI3intheABAsignaling.Keywords:OsDMI3;ABAsiganling;OsUGD0引言30ABA(absicsicacid)是一种经典的植物激素，调节植物体内多种生理过程，并在植物响应2+环境胁迫中起着重要的作用。大量研究显示，ABA信号通路中的第二信使包括Ca、一氧2+化氮（NO）、活性氧（ROS）等。它们中的一些通过质膜上的通道使Ca释放或流入细

6、胞2+来改变胞浆中Ca的浓度，这些离子通道被信使ROS激活，如NADPH氧化酶产生的H2O2【1】2+2+。Ca需要与受体蛋白结合将信号传递至下游，而CaM作为植物中重要的Ca受体蛋白基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20130097110025）作者简介：李溪（1989年-），男，硕士通信联系人：蒋明义（1962年-），男，教授，博导.E-mail:myjiang@njau.eud.cn-1-中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn35其本身并不具有活性，其介导的信号通路及相关生理反应均通过钙调素结合蛋白（CaMBPs）[2]2+来实现。CaMBPs成

7、员之一的Ca/CaM依赖型蛋白激酶（CCaMK）已经被证实是脱落酸（ABA）信号转导中的一个重要组分，调控根的生长、抗氧化防护和植物对水分胁迫、氧化胁迫的耐性。水稻中OsDMI3（CCaMK）已被证实参与ABA诱导抗氧化防护途径，作用[3,4]于OsMPK1上游来调节抗氧防护酶的活性。然而OsDMI3在这一过程中的作用机制仍有40待阐明。阐明ABA信号途径中OsDMI3互作蛋白对于阐明CCaMK在植物应答胁迫反应中的作用机制是十分重要的。先前的研究已经证实