1株山羊节杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测_邓亚飞

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安徽科技学院学报，２０２２，３６（６）：８－１２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ１株山羊节杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测邓亚飞１，郭伟娜１，２，刘畅１，２，贺绍君１，２，路振香１，２＊（１．安徽科技学院动物科学学院，安徽凤阳２３３１００；２．动物营养调控与健康安徽省重点实验室，安徽凤阳２３３１００）摘要：目的：对送检的局部皮下出现包块的病山羊进行病原菌的分离鉴定，并对该致病菌的耐药情况及机制进行初步研究。方法：采集病山羊皮下包块内的组织液进行病原菌分离培养、革兰染色、镜检、生化试验和药物敏感试验以及分子水平鉴定，并检测耐药基因。结果：成功分离到１株革兰阳性、排列不规则的球菌，同源性分析显示为节杆菌。该菌对克林霉素、头孢噻吩、氧氟沙星等不敏感；对链霉素、麦迪霉素、头孢曲松中度敏感；对红霉素、青霉素、头孢呋辛等敏感。该菌含有磺胺类耐药基因ｓｕｌ１与卡那霉素耐药基因ａａｄＡ１。结论：该分离菌具有较强的耐药性，携带有耐药基因ｓｕｌ１与ａａｄＡ１。关键词：节杆菌；分离鉴定；药敏试验；耐药基因；山羊中图分类号：Ｓ８５５．３文献标志码：Ａ文章编号：１６７３－８７７２（２０２２）０６－０００８－０５开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：ＤＯＩ：１０．１９６０８／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７３－８７７２．２０２２．００７３ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａＳｔｒａｉｎｏｆＧｏａｔ＇ｓＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ，ＤｒｕｇＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＴｅｓｔａｎｄＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＧｅｎｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎ１，ＧＵＯＷｅｉｎａ１，２，ＬＩＵＣｈａｎｇ１，２，ＨＥＳｈａｏｊｕｎ１，２，ＬＵＺｈｅｎｘｉａｎｇ１，２＊ＤＥＮＧＹａｆｅｉ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，Ｃｈｉｎａ；２．ＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌＲｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄＨｅａｌｔｈ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍｇｏａｔｓｗｉｔｈｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｕｍｐｓ，ａｎｄｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｗｅｒｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｓｔｕｄｉｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｉｓｓｕｅｆｌｕｉｄｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｇｏａｔｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｍａｓｓｆｏｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅ，ｇｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇ，ｍｉｃｒｏ－ｓｃｏｐｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｓｔ，ｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃ－ｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｆｒｏｍｔｈｅａｂｏｖｅｐａｒｃｅｌｐｉｅｃｅｉｎｓｅｐａｒａｔｅｔｏｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅａｒｒａｎｇｅ－ｍｅｎｔｉｓｉｒｒｅｇｕｌａｒａｕｒｅｕｓ，１ｓｔｒａｉｎｈｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｅｃｔｉｏｎｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎｗａｓｎｏｔｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ，ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅ，ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ｅｔｃ．Ｉｔｗａｓｍｏｄｅｒａｔｅｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ｍｅｄｅｍｙｃｉｎａｎｄｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅａｎｄｓｏｏｎ．Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ收稿日期：２０２２－０８－２１基金项目：安徽科技学院乡村振兴专项（２０２１ＸＣＺＸ０５）；安徽科技学院发展基金（ＦＺ２２０１４０）；安徽省高校协同创新项目（ＧＸＸＴ－２０１９－０３５）。作者简介：邓亚飞（１９９７－），男，安徽阜阳人，硕士研究生，主要从事羊致病菌地区流行特性与病原分子学特性研究。通信作者：路振香，教授，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｚｈｅｎｘｉａｎｇ２００２＠１２６．ｃｏｍ。

1第３６卷第６期邓亚飞，等：１株山羊节杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测９ｃｏｎｔａｉｎｓｓｕｌ１ａｎｄａａｄＡ１ｇｅｎｅｏｆｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｄｓｔｒｏｎｇｄｒｕｇｒｅ－ｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｃａｒｒｉｅｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｓｕｌ１ａｎｄａａｄＡ１．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ；Ｇｏａｔ节杆菌（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐｐ．）为放线菌纲，放线菌亚纲，放线菌目，微球菌亚目，微球菌科。该菌革兰阳［１］性，需氧，生长过程中有明显的杆状和球状周期变化。节杆菌对多种有机物有降解作用，被认为是主要［２］的有机物分解者。该菌可在营养缺乏、温度剧变、辐射、氧自由基和有毒物等环境中长期存活，对部分重［３－５］［６－９］金属和铬酸盐等有毒物质有很强的耐受性。该菌是土壤中最常分离出的菌种之一，目前有感染导［１０］致人慢性皮肤病变及节杆菌菌血症等相关记录。近年来，从人体标本中分离到６种节杆菌为条件致病［１１］［１２］［１３］菌，分别为卡氏节杆菌、沃氏节杆菌、解肌酐节杆菌、氧化节杆菌、黄色节杆菌和白色节杆菌。节杆菌分布广泛，受环境抗生素特别是抗生素使用量大的场所影响较大，其耐药性研究对防治节杆菌引起的临床疾病有重要意义。本研究拟对安徽省滁州市某山羊养殖场送检的右侧肋腹部近尾端位置皮下出现５～１２ｃｍ大小的皮下脓肿的病山羊进行病原菌的分离培养、革兰染色、镜检、生化试验、药敏试验，并对其进行１６ＳｒＲＮＡ序列扩增、同源性分析及耐药基因检测，为该病的实验室诊断、临床治疗及耐药情况提供参考。１材料与方法１．１材料１．１．１样本材料安徽省滁州市某山羊养殖场３只病山羊的皮下包块。１．１．２主要试剂药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司（生产批号：２０１８０６１４）；Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ购自宝生物工程（大连）有限公司；引物由通用生物技术（安徽）有限公司合成。１．１．３主要仪器ＥＴＣ８１１梯度ＰＣＲ仪（东胜兴业科学仪器有限公司）；电泳仪（美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）；凝胶系统成像仪（上海天能科技有限公司）。１．２方法１．２．１病原菌的分离培养、纯化与革兰染色、镜检从山羊皮下包块处无菌穿刺，并用灭菌接种环蘸取此穿刺液分别于麦康凯琼脂、普通营养琼脂培养基上划线，３７℃培养２４～４８ｈ，挑取培养出的单个典型菌落进行纯化，革兰染色后镜检。［１４］１．２．２分离菌的生化试验分离菌纯化后进行糖发酵试验、ＭＲ试验、Ｖ－Ｐ试验及吲哚试验。１．２．３分离菌的药敏试验用涂布棒刮取适量纯化后的分离菌均匀涂布在普通营养琼脂平板表面，将药敏纸片均匀地贴上，３７℃培养１６～１８ｈ，观察并记录结果。１．２．４分离菌ＤＮＡ模板的制备用接种环取分离纯化后的典型菌落于１００μＬ的超纯水中，混匀，１００℃水浴１０ｍｉｎ后，冰浴５ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取上清液，置于－２０℃下保存备用。１．２．５分离菌的１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ扩增与序列测定参照细菌的通用引物设计一对引物，上游引物序列：５’－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３’，下游引物序列：５’－ＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＣＣＧＣＡ－３’。ＰＣＲ反应体系为：Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ９．５μＬ、上、下游引物各１μＬ（０．４μｍｏｌ／Ｌ），细菌ＤＮＡ模板５μＬ，超纯水８．５μＬ。总体积为２５μＬ。ＰＣＲ反应条件为：９５℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ；５５℃退火３０ｓ；７２℃延伸４５ｓ，共３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ。扩增完成后，将所得ＰＣＲ产物用１％琼脂凝胶电泳（１１０Ｖ、３０ｍｉｎ）进行检测。［１５］１．２．６分离菌的耐药基因检测参照刘红玉的方法合成本试验所需细菌耐药基因引物，引物序列如表１所示。本次试验所扩增的耐药基因分别是编码β－内酰胺酶类耐药基因ｂｌａｔｅｍ－１，磺胺类耐药基因ｓｕｌ１，喹诺酮类耐药基因ｑｎｒ，头孢菌素类耐药基因ｂｌａＣＭＹ－２以及卡那霉素耐药基因ａａｄＡ１。ＰＣＲ反应体系为：Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ１２．５μＬ，上、下游引物各１μＬ（０．４μｍｏｌ／Ｌ），细菌ＤＮＡ模板２μＬ，超纯水８．５μＬ。总体积为２５μＬ。反应条件为９４℃预变性１０ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ；５９℃退火３０ｓ；７２℃延伸４５ｓ，共

2１０安徽科技学院学报２０２２年３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ。表１耐药基因ＰＣＲ扩增序列Ｔａｂｌｅ１ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓ耐药基因引物名称引物序列（５’→３’）产物大小／ｂｐｂｌａｔｅｍ－１ｂｌａｔｅｍ－１ＦＴＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＧＡＡＡＣＧＣＴＧＧＴ６０１ｂｌａｔｅｍ－１ＲＧＣＣＧＡＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＴＣＣｂｌａＣＭＹ－２ｂｌａＣＭＹ－２ＦＣＣＡＣＴＴＴＧＣＴＧＴＣＧＣＴＧＣＣＧ６６２ｂｌａＣＭＹ－２ＲＣＧＴＧＴＴＧＧＧＣＧＧＣＧＡＴＧＣＴＡＴｓｕｌ１ｓｕｌ１ＦＴＧＧＣＧＴＣＧＣＧＡＣＴＧＣＧＡＡＡＴ８１３ｓｕｌ１ＲＴＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＴＴＣＴａａｄＡ１ａａｄＡ１ＦＧＣＣＣＡＴＣＴＣＧＡＡＣＣＧＡＣＧＴＴ５７３ａａｄＡ１ＲＧＣＣＡＣＴＣＧＧＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣｑｎｒｑｎｒＦＣＡＣＣＧＣＴＴＧＣＡＣＡＴＴＣＡＴＴＣＧＣ４５０ｑｎｒＲＡＣＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＧＧＣＧＴＧＧ２结果与分析２．１致病菌分离培养及革兰染色、镜检结果从山羊皮下包块组织液中分离到１株革兰阳性、排列不规则的球菌，该菌在普通营养琼脂平板上呈淡黄色圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、轻度隆起、不透明的中等大小菌落。在麦康凯琼脂平板上为灰白色圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、轻度隆起、不透明的中等大小菌落。在兔血琼脂平板上为灰白色圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、轻度隆起、不透明不溶血的中等大小菌落（图１）。图１细菌在几种培养基上的生长表现及革兰染色结果Ｆｉｇ．１ＧｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄＧｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｏｎｓｅｖｅｒａｌｍｅｄｉａ注：Ａ为普通营养琼脂平板；Ｂ为麦康凯琼脂平板；Ｃ为兔血琼脂平板；Ｄ为革兰染色结果（１０００×）。２．２分离菌生化试验结果该菌不发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖，ＭＲ试验、Ｖ－Ｐ试验及吲哚形成试验结果均呈阴性。２．３分离菌药敏试验结果药敏试验结果显示，该分离菌对克林霉素、头孢噻吩、氧氟沙星、四环素、复方新诺明、氨曲南不敏感；对链霉素、麦迪霉素、头孢曲松中度敏感；对红霉素、青霉素、头孢呋辛、万古霉素、克拉霉素、苯唑西林、诺氟沙星敏感（表２）。表２分离菌药敏试验结果Ｔａｂｌｅ２Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ药物抑菌圈直径／ｍｍ药物抑菌圈直径／ｍｍ红霉素２６链霉素１５氨曲南－复方新诺明－万古霉素２０麦迪霉素１１克林霉素－头孢噻吩－青霉素２６头孢曲松１０氧氟沙星－－克拉霉素２７四环素－诺氟沙星２２头孢呋辛２０苯唑西林２５

3第３６卷第６期邓亚飞，等：１株山羊节杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测１１２．４分离菌１６ＳｒＲＮＡ序列扩增结果和分离菌进化树构建结果由图２～３所示，该菌与ＧｅｎＢａｎｋ中的节杆菌ＨＱ５８５３３８．１同源率达１００％。因此，该菌为节杆菌。图２分离菌株１６ＳｒＲＮＡ基因序列ＰＣＲ产物凝胶电泳图图３分离菌１６ＳｒＲＮＡ遗传进化树Ｆｉｇ．２ＧｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓＦｉｇ．３Ｇｅｎｅｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ注：ＧｏａｔＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ．ｓｅｑ为该分离菌。注：Ｍ为Ｄ２０００，１为分离菌。２．５分离菌耐药基因ＰＣＲ扩增结果结果显示，ｂｌａｔｅｍ－１、ｂｌａＣＭＹ－２、ｑｎｒ耐药基因检测结果为阴性，ｓｕｌ１、ａａｄＡ１扩增出预期大小片段（图４）。图４分离菌耐药基因凝胶电泳图Ｆｉｇ．４Ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ注：Ｍ为Ｄ２０００，１－５分别为ｂｌａｔｅｍ－１、ｂｌａＣＭＹ－２、ｓｕｌ１、ａａｄＡ１、ｑｎｒ。３结论与讨论节杆菌多数为非致病性的菌株，研究者多从节杆菌分解环境中有毒害物质、有机物等方向展开研究，而对其致病特性研究却较少。考虑到节杆菌种群在生态环境中分布广泛、适应性强以及营养多功能性等优势地位，其致病情况和致病机理也应当予以重视。分布广泛即意味着其接触到抗生素的群体大且接触抗生素种类多，因此其耐药情况以及机制也应当及时受到关注，从而保证一旦发病，能够及时有效得到治疗和控制。本试验从患病山羊的皮下包块组织液中分离得到１株排列不规则的革兰阳性球菌，从细菌形态、培养特性来看，该分离菌与金黄色葡萄球菌极其相似，金黄色葡萄球菌也是常见的导致外伤感染的细菌，初步判定为金黄色葡萄球菌感染所致。但对该分离菌同源性比对结果显示，该菌与ＧｅｎＢａｎｋ中登录号为ＨＱ５８５３３８．１的节杆菌同源性达１００％，因此，鉴定该菌为节杆菌。与提交自河北保定的ＫＴ９０５７３２．１、山东泰安的ＤＱ１９１３２２．１、湖北武汉的ＪＸ４７７８０２．１、江苏南京的ＦＪ４７９７４７．１以及新德里的ＡＭ４９１８０１．１等菌株亲缘关系较低，这也与地域性的分布差异存在一定联系。药敏试验结果显示，红霉素、青霉素、克拉霉素、苯唑西林、诺氟沙星、万古霉素等药物对分离菌有较好

4１２安徽科技学院学报２０２２年的抑制效果，而氨曲南、复方新诺明、克林霉素、头孢噻吩等药物对分离菌没有效果。耐药基因扩增结果显示，该菌含有磺胺类耐药基因ｓｕｌ１与卡那霉素耐药基因ａａｄＡ１。本实验中未检测出头孢菌素类耐药基因ｂｌａＣＭＹ－２，因此对头孢菌素类药物的耐药机理仍需进一步深入研究。后对病山羊患处进行包块组织液引流和消毒处理，同时肌肉注射青霉素进行治疗。该羊的羊圈围栏采用金属材质，棱角清晰且存在多处尖锐部位，山羊性情活泼好动，皮肤很容易被围栏上的锐物划伤，环境中的节杆菌通过伤口进入皮肤造成感染。由于羊毛遮挡畜主不能及时发现伤口做消毒处理，从而使得节杆菌在其中大量繁殖，形成肉眼可见的肿胀包块。此类感染大多与外伤密切相关，因此，对于舍饲山羊，围栏需要表面光滑，避免有尖锐物出现；对于放牧羊群，避免在有荆棘等易造成划伤的地方放牧，从而避免或者减少该病的发生。从药敏试验和耐药基因ＰＣＲ扩增结果可知，该株节杆菌对一些抗生素不敏感。集约化养殖模式下，一些养殖者不具备相关的知识和条件，当疾病发生时，往往会大剂量不规范地使用抗生素，这会很快导致耐药菌株产生。因此，如何规范使用抗生素，使用什么样的抗生素，以及如何延缓耐药菌的出现都是值得兽医工作者重视的问题。综上，本次出现局部皮下包块为特征的山羊是皮肤出现外伤后感染节杆菌所导致的，且此株节杆菌表现出较强的耐药性，具有多种耐药基因。参考文献：［１］李娟，ＣＯＮＳＴＡＮＴＩＮＥＵ，冷艳，等．节杆菌属细菌处理有机物和重金属污染物的研究进展［Ｊ］．环境科学与技术，２０１７，４０（１０）：８９－９７．［２］ＭＯＮＧＯＤＩＮＥＦ，ＳＨＡＰＩＲＮ，ＤＡＵＧＨＥＲＴＹＳＣ，ｅｔａｌ．ＳｅｃｒｅｔｓｏｆｓｏｉｌｓｕｒｖｉｖａｌｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｔｈｅｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｕｒｅｓｃｅｎｓＴＣ１［Ｊ］．ＰＬｏＳＧｅｎｅｔ，２００６，２（１２）：ｅ２１４．［３］ＬＩＰ，ＷＡＮＧＹＨ，ＤＡＩＸＹ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｈｉｇｈａｒｓｅｎｉｃｓｈａｌｌｏｗｇｒｏｕｎｄｗａｔｅｒａｑｕｉｆｅｒｓｉｎｈｅｔａｏｂａｓｉｎｏｆＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（５）：ｅ０１２５８４４．［４］陈志，邹情雅，潘晓鸿，等．铅锌矿尾矿坝分离节杆菌１２－１对Ｐｂ２＋的耐受和吸附性能研究［Ｊ］．农业生物技术学报，２０１４，２２（１１）：１３９４－１４０１．［５］金羽，曲娟娟，李影，等．一株耐铅细菌的分离鉴定及其吸附特性研究［Ｊ］．环境科学学报，２０１３，３３（８）：２２４８－２２５５．［６］ＨＥＹＲＭＡＮＪ，ＶＥＲＢＥＥＲＥＮＪ，ＳＣＨＵＭＡＮＮＰ，ｅｔａｌ．ＳｉｘｎｏｖｅｌＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｅｄｍｕｒａｌｐａｉｎｔｉｎｇｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＳｙｓｔＥｖｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００５，５５（４）：１４５７－１４６４．［７］ＭＡＨＥＳＩＳ，ＦＲＯＤＬＲ，ＢＥＲＮＡＲＤＫＡ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｔｉｅｓｏｆＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐｐ．ａｎｄＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ－ｌｉｋｅｂａｃｔｅｒｉａｅｎｃｏｕｎｔｅｒｅｄｉｎｈｕｍａｎｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００８，４６（９）：２９８０－２９８６．［８］ＯＲＬＡＮＤＩＮＩＶ，ＭＡＩＤＡＩ，ＦＯＮＤＩＭ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｒｅｅｓｐｏｎｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒＡｎｔａｒｃｔｉｃｓｔｒａｉｎｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅｐａｃｉａｃｏｍｐｌｅｘｂａｃｔｅｒｉａｂｙｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇｖｏｌａｔｉｌｅｏｒｇａｎｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｓ，２０１４，１６９（７／８）：５９３－６０１．［９］ＷＡＮＧＨＦ，ＬＩＬ，ＺＨＡＮＧＹＧ，ｅｔａｌ．Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｕｓｓｐ．ｎｏｖ．，ａｎｏｖｅｌｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｏｏｔｏｆＳａｌｓｏｌａａｆｆｉｎｉｓ（Ｃ．Ａ．Ｍｅｙ）［Ｊ］．ＩｎｔＪＳｙｓｔＥｖｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１５，６５（７）：２１５４－２１６０．［１０］尤敏，管福来，赵乃昕，等．一种条件致病节杆菌的分离与鉴定［Ｊ］．潍坊医学院学报，２００３，２５（２）：９６－９８．［１１］ＦＵＮＫＥＧ，ＨＵＴＳＯＮＲＡ，ＢｅｒｎａｒｄＫＡ，ｅｔａｌ．ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐｐ．ｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓａｎｄｄｅｓｃｒｉｐ－ｔｉｏｎｏｆＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｃｕｍｍｉｎｓｉｉｓｐ．ｎｏｖ．ａｎｄＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｗｏｌｕｗｅｎｓｉｓｓｐ．ｎｏｖ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９６，３４（１０）：２３５６－２３６３．［１２］ＷＡＵＴＥＲＳＧ，ＣＨＡＲＬＩＥＲＪ，ＪＡＮＳＳＥＮＳＭ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｏｘｙｄａｎｓ，Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｌｕｔｅｏｌｕｓｓｐ．ｎｏｖ．，ａｎｄＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｌｂｕｓｓｐ．ｎｏｖ．，ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，３８（６）：２４１２－２４１５．［１３］王静，孙艳，杨海麟，等．节杆菌Ｍ３黄嘌呤氧化酶的诱导效应研究［Ｊ］．生物技术，２００８，１８（６）：６９－７１．［１４］姚火春．兽医微生物学实验指导［Ｍ］．２版．北京：中国农业出版社，２００２．［１５］刘红玉．青岛地区禽源Ｅ.ｃｏｌｉ毒力因子和耐药性调查与分析［Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２０１４．（责任编辑：姜锦鹏）