DB43∕T 2008-2021 茄子抗青枯病鉴定技术规程(湖南省)

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ICS65.020CCSB16□B43湖南省地方标准DB43/T2008—2021茄子抗青枯病鉴定技术规程RegulationforevaluationofeggplantresistancetoBacterialwilt

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2DB43/T2008—2021目次前言························································································································Ⅲ1范围·····················································································································12规范性引用文件······································································································13术语和定义············································································································14接种体制备············································································································15室内抗性鉴定·········································································································26病情调查···············································································································37抗病性评价············································································································48抗性鉴定记载·········································································································4附录A（资料性）茄子抗青枯病鉴定结果记载表格·························································5I

3DB43/T2008—2021II

4DB43/T2008—2021前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省蔬菜研究所。本文件主要起草人：杨建国、汪端华、吴双花、李倩、王鑫、皮向红、宋志伟。III

5DB43/T2008—2021IV

6DB43/T2008—2021茄子抗青枯病鉴定技术规程1范围本文件规定了茄子青枯病鉴定的术语和定义、接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价以及抗性鉴定记载等要求。本文件适用于湖南地区茄子青枯病抗性鉴定。2规范性引用文件本文件没有引用规范性文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1茄子青枯病Bacterialwilt由茄科劳尔氏菌（Ralstoniasolanacearum）侵染引起的土传病害，细菌性病害，发病初期茄子个别枝条的一片或几片叶片局部萎垂，后症状逐渐扩展到整株枝条上，发病轻的植株白天萎蔫，日落或早晨恢复正常。发病叶片初呈淡绿色，后变褐焦枯，病叶脱落或残留在枝条上；发病枝条髓部大多腐烂空心，维管束呈黄色或褐色，髓部和皮层组织也变色，用手挤压病茎的横切面有乳白色粘液渗出，病果表面正常，内部变褐色，后期病果呈水渍状，易脱落。3.2病原分离物Pathogenicisolate采用人工方法从植株发病部位分离获得病原物的纯培养物。3.3致病性Pathogenicity病原物所具有的破坏寄主植物和引起病变的能力。3.4人工接种Artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程。4接种体制备4.1病原物的分离与鉴定采集自然发病的田间植株，在超净工作台中，将发病茎段在75％酒精中浸泡90s，灭菌水清洗2次～3次，再放入0.2％次氯酸钠（Naclo）中浸泡3min～5min，灭菌水清洗2次～3次，用灭菌滤纸吸干茎段表面的水分，并将茎段切开，然后放入少量灭菌水中浸泡10min，待看到明显的菌液渗出，1

7DB43/T2008—2021吸取细菌粗悬液，涂布在TZC（氯化三苯四氮唑）固体选择性培养基上，放入30℃恒温箱中培养48h，用灭菌的牙签挑单个红色菌落，接种至TZC液体培养基中后，放入30℃摇床培养48h，用细菌提取试剂盒提取菌液DNA，利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增青枯菌特异片段，并进行测序鉴定（青枯菌鉴定引物见表1）。表1青枯菌鉴定特异引物引物名称引物序列目的片段长度退火温度正向引物GTCGCCGTCAACTCACTTTCC280bp60℃反向引物GTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCG4.2病原物的繁殖4.2.1病原物的繁殖将青枯菌菌液吸取10μL～20μL涂布或划线于TZC固体选择性培养基上，放入30℃恒温箱中倒置培养48h。用灭菌的牙签挑单个菌落，接种TZC液体培养基中后，放入30℃摇床进行培养。4.2.2TZC选择性培养基的配制现配现用，3g蔗糖，5g～10g蛋白胨，3g牛肉浸膏，7g琼脂粉，加蒸馏水定容至1000ml，调pH值至7.0，高温灭菌后加入0.05％的氯化三苯四氮唑。4.3接种体的制备将增殖培养的病原菌液用无菌水稀释，用紫外分光光度计在波长600nm处测定病菌浓度，将菌液8浓度调制成为10cfu/mL（OD600=0.1）悬浊液。5室内抗性鉴定5.1鉴定室人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度和光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。5.2鉴定设计鉴定材料顺序或者随机排列，每份材料重复3次，每一重复10株苗。5.3鉴定材料准备待鉴定的种子先在2％的NaClo溶液中浸种8min～10min，用灭菌水冲洗干净后置于28℃的恒温培养箱中催芽，露白后播种于育苗钵内。育苗基质为草木灰（或草炭）、蛭石、菜地土以2∶1∶1的比例混合（或沙性土壤与草炭以3∶2的比例混匀），并经高温蒸汽灭菌（134℃，40min），在温室或大棚里育苗，温室或大棚的温度控制在25±2℃。幼苗应生长健壮、大小一致。5.4接种5.4.1接种期5片～6片真叶进行接种。2

8DB43/T2008—20215.4.2接种体浓度8接种浓度10cfu/mL。5.4.3接种方法采用伤根--蘸根法进行人工接种，先用刀将植株根部切伤，再将50mL菌液倒入营养钵中。5.4.4接种后的管理每天浇水1次～2次保持土壤湿润，保持白天温度为30±2℃，夜间为28±2℃，相对湿度（RH）＞95％。6病情调查6.1调查时间接种后7d～15d调查病情。6.2病情级别划分病情级别及其相对应的症状描述（见表2）。表2茄子抗青枯病室内鉴定病情级别的划分病情级别病情描述0全叶无叶片感病10.5片～1片叶失水萎焉状22片～3片叶片枯萎33片以上叶片枯萎4全部叶片枯萎死亡6.3调查方法调查每份鉴定材料接种病原物后的发病情况，依据病害症状描述，逐份调查和登记病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数的计算见公式（1）计算。病情指数计算公式1：∑(s×n)DI100…………………………………………………（1）NS公式中:DI——病情指数；s——各病情级别的代表数值；n——各病情级别的植株数；N——调查总植株数；S——最高病情级别的代表数值；3

9DB43/T2008—20217抗病性评价7.1抗病性评价标准根据病情指数（DI）确定其抗性水平，划分标准（见表3）。表3茄子抗青枯病鉴定的评价标准病情指数（DI）抗性评价DI=0免疫（I）0＜DI≤20高抗（HR）20＜DI≤40抗病（R）40＜DI≤60中抗（MR）60＜DI≤80感病（S）DI＞90高感（HS）7.2鉴定结果的有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（DI＞50），该批次的抗青枯病鉴定即为有效。8抗性鉴定记载茄子抗青枯病鉴定结果记载（见附录A）。4

10DB43/T2008—2021附录A（资料性）茄子抗青枯病鉴定结果记载表A1茄子抗青枯病鉴定结果记载表病情级别品种重复编号病情指数名称区号01234ABC评价病指抗性评价播种日期接种日期病原分离物编号病原物接种浓度调查日期调查人员5