DB65∕T 4497-2022 绵羊腹腔镜定时输精技术操作规程(新疆维吾尔自治区)

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ICS65.020.30CCSB43□B65新疆维吾尔自治区地方标准DB65/T4497—2022绵羊腹腔镜定时输精技术操作规程Technicalspecificationoflaparoscopictiminginseminationinsheep2022-05-09发布2022-07-01实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布

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2DB65/T4497—2022刖言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由新疆农垦科学院畜牧兽医研宄所提出。本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。本文件起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。本文件主要起草人：万鹏程、石国庆、倪建宏、刘长彬、卢守亮、傅祥伟、郭延华、代蓉、刘昱成、张振良、王晶晶。本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆农垦科学院畜牧兽医研宄所。对本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区畜牧兽医局（乌鲁木齐市新华南路408号）、新疆农垦科学院畜牧兽医研宄所（石河子市乌伊公路221号）、新疆维吾尔自治区市场监督管理局（乌鲁木齐市新华南路167号）。新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话:0991-8568089；传真:0991-8527722；邮编:830004新疆农垦科学院畜牧兽医研宄所联系电话：0993-6683760；传真：0993-6683760；邮编：832000新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2818750；传真：0991-2311250；邮编：830004I

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4DB65/T4497—2022绵羊腹腔镜定时输精技术操作规程1范围本文件规定了绵羊腹腔镜定时输精技术操作的术语和定义、母羊同期发情处理、精液准备、腹腔镜输精程序、母羊术后管理、妊娠诊断、信息记录的要求。本文件适用于绵羊腹腔镜定时输精技术推广应用的规范化操作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T3186羊冷冻精液生产技术规程DB65/T4119绵羊细管冷冻精液操作规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1定时输精timingartificialinsemination(TAI)通过对性成熟母羊进行同期发情处理后，人为控制母羊排卵并准时进行人工授精的技术方法。3,2同期发情synchronizationofestrus利用促性腺激素处理性成熟母羊，集中对整群繁殖母羊进行人工诱导发情排卵的技术方法。3.3腹腔镜输精laparoscopicartificialinsemination(LAI)利用腹腔内窥镜观察发情母羊卵桌排卵状况，配合专用输精设备将合格公羊的精液直接输入母羊排卵一侧子宫角，从而提高母羊受胎率的一种人工输精技术。4母羊同期发情处理4.1母羊的选择重点选择繁殖性能正常，检疫达标，健康，营养状况良好，性成熟和体成熟合格的2岁4岁的母羊，也可选择空怀或断奶4周后，且泌乳、育羔性能良好的经产母羊。4.2母羊的同期发情4.2.1自然发情4.2.1.1适用于大群母羊，釆用公羊试情法，根据母羊对试情公羊的反应行为来判断其是否发情。

5DB65/T4497—20224.2.1.2每天试情2次（上午8:009:00,下午20:0021:00各1次），将试情公羊放入母羊群中,让公羊自由接触母羊，接受公羊爬跨站立不动的母羊确定为发情母羊，挑选出来配种。4.2.24.2.2.1绵羊诱导同期发情分为孕激素类和前列腺素类控制两类方法。孕激素阴道栓法是一种常用的方法。4.2.2.2孕激素阴道栓+孕马血清促性腺激素PMSG)方法，在母羊发情周期的任意一天，将孕激素阴道栓放置在母羊的阴道深部，放置当天记为0d,第13d14d撤出阴道栓，肌内注射PMSG(400IU),撤栓24h48h前后母羊集中表现发情，母羊发情后12h24h进行腹腔镜输精。4.2.2.3发情鉴定见4.2.1.2。5精液准备5.1精液采集5.1.1用于采精的公羊，其体型外貌和生产性能均应符合该品种的种用标准。主配公羊要进行后裔测定，应充分发挥优秀公羊的利用率。5.1.2种公羊应体质健壮。定期进行检疫，应无疫病、无生殖与遗传疾病。对新引入的种公羊，应在隔离场所经过动物防疫监督执法机构进行血清和原精检疫，确诊无疫病者，方可使用。5.1.3用假阴道法，严格按常规人工授精操作规程采精。5.1.4釆精频率，宜采精2d，每天采精2次，休息Id或隔日釆精，在采精当天，宜连采2次（每次间隔10min16min)。5.1.5种公羊的新鲜精液，应符合下述要求，不具备任何一项者，不应用于制作冻精。a)新鲜精液的色泽应呈乳白稍带黄色；b)呈直线运动的精子>70%;•c)精子密度彡2x:09个/mL;’d)精子畸形率<10%。5.2精液的稀释应符合DB65/T4119的要求。5,3冻精制作与准备应符合NY/T3186和DB65/T4119的要求。6腹腔镜输精程序6.1输精母羊选择被输精的发情母羊抓出隔离，标记，以备配种。6,2输精要求6.2.1鲜精输精

6DB65/T4497—2022公羊在釆精后应先在显微镜下检查精液活力，鲜精与稀释液的稀释比例宜为1:31:4。6.2.2冻精输精7个的精子可用，腹腔镜子宫角输精，解冻后精子活率0.3以上，呈直线前进运动的精子数不少于lxlO一次输精剂量0.2mL6.3输精时间6.3.1自然发情母羊输精时间自然发情的母羊以发情日为Od在母羊发情后12h18h进行腹腔镜输精1次。6.3.2同期发情母羊输精时间同期发情处理的母羊，在撤除阴道栓后48h56h进行腹腔镜输精1次。6.4手术室设置及要求输精操作间应干净明亮，光线充足、无尘。室内温度保持在20°C25°C早、晚用3%5%煤酚皂（来苏儿）或石炭酸溶液喷洒消毒。输精前后用紫外灯(lW/m3)照射消毒lh2h操作过程中不应随意开启门窗。6.5手术器械的准备6.5.1手术用的金属器械置于含0.5%亚硫酸钠（作为防锈剂）的0.1%新洁尔灭液中浸泡30min6.5.2玻璃器皿，敷料和创巾等物品消毒宜采用高压蒸汽消毒(0.1MPa,121°C15min30min)。6.5.3精液稀释液置于37°C水浴加温，玻璃器皿置于38°C培养箱内或恒温热台待用。6.5.4输精枪、搪瓷盘、细管剪刀用75%酒精棉球擦拭消毒、晾干。输精枪套管内用75%酒精冲洗，外壁用75%酒精棉球擦拭消毒，使用前0.9%氯化钠溶液冲洗擦拭晾干，置于紫外线灯下照射消毒30min60min输精主要器械与设备参见附录A6.6输精母羊准备输精母羊手术前禁食禁水24h6.6.1母羊的保定母羊仰卧在专用手术架上，固定四肢，角度为40°60°。6.6.2手术部位及其准备手术部位在乳房下方10cm14cm离腹中线4cm处。术前应刮去腹部破毛，清水清洗后，用2%5%碘酊消毒，待干后再用75%酒精脱碘。6.6.3麻醉母羊输精前5min肌内注射速眠新麻醉药，按说明书用量进行麻醉处理，麻醉后5mm10min进行输精操作。输精前5min,输精后注射同等剂量的鹿醒宁解麻。6.7术者的准备

7DB65/T4497—2022术者用0.1%新洁尔灭溶液清洗手臂擦于，进入输精操作室，穿戴无菌手术服、工作帽和口罩，用75%酒精棉球擦拭消毒手臂，戴医用乳胶手套。6.8手术操作6.8.1基本要求手术操作要求无菌、细心、谨慎、熟练，无菌操作应在30miti内完成。6.8.2腹腔镜及输精枪套管打孔注意要点6.8.2.1腹腔镜和输精枪套管在母羊腹部手术部位打孔。6.8.2.2避开腹部皮下较大血管和神经。6.8.2.3穿透腹壁后应立刻停止用力，以免刺穿胃、肠、膀胱等器官。6.8.2.4腹腔镜观察两侧卵巢排卵情况。6.8.2.5将精液正确输入排卵一侧或两侧的子宫角内。6.9腹腔镜输精操作6.9.1装枪6.9.1.1细管冻精解冻后用消毒纸巾或纱布擦干水分。6.9.1.2剪去封口端，棉塞一端套到输精枪钢芯上。6.9.1.3将钢芯拉到底套上输精枪外套管。6.9.1.4细管切口端与套管针头端顶紧。6,9.1.5外套管后端与输精枪后螺纹旋转卡紧。6.9.1.6轻推钢芯有精液从套管针孔溢出。6.9.1.7递给术者进行输精操作。6.9.2穿刺6.9.2.1术者站立或坐在输精母羊左后侧。6.9.2.2从0.1%新洁尔灭液消毒桶中取出穿刺套管和穿刺针，穿刺腹腔镜观察孔，将穿刺针插入穿刺套管中。6.9.2.3右手抓起手术部位皮肤和肌肉组织错开。6.9.2.4左手食指和中指握住穿刺套管，手心顶住穿刺针柄，以握拳状将针以向内45°进行穿刺。6.9.2.5当前端刺入皮肤后，将穿刺针撤出，使用套管向腹腔内进行钝性穿刺。按此方法，将1.0cm和0.5cm直径穿刺针分别刺入腹中线两侧。6.9.3确定输精部位6.9.3.1打开二氧化碳钢瓶减压阀门，通过腹腔镜套管的进气阀向母羊腹部充气5s10s6.9.3.2在0.5cm直径套管中插入长钳，1cm直径套管中插入腹腔内窥镜。6.9.3.3通过长钳轻挑子宫轻轻向右侧方向带动输卵管，可通过腹腔内窥镜观察到卵巢，观察卵泡发育情况。6.9.3.4观察卵巢状况时，不应用腹腔镜冷光源探头或输精枪触碰卵巢。

8DB65/T4497—20226.9.3.5观察子宫、卵巢状态，卵巢上有卵泡或卵泡刚刚排出，排出部位呈现火山口状或新鲜的出血点时，进行输精。6.9.4输精及输精剂量6.9.4.1术者通过长钳将子宫角调整到中线正对视野范围内，撤出长钳，将己放置了冻精的输精枪插入到撤出的套管中。6.9.4.2借助冷光源对准子宫角上1/3(大弯）处，手腕用力将针头垂直刺入子宫角内，刺入的感觉类似于用针刺破有弹性的乳胶手套或气球。6.9.4.3输精枪前端细针插入子宫角部位，宜选在子宫角正中线，也可选在子宫角侧面突起较大的部位，不应选在子宫角内侧或皱褶较多的部位。6.9.4.4将精液慢慢输入子宫角内。推动输精枪钢芯注入1/2的精液后退出针头。⋯6.9.4.5用同样的方法将剩余的精液注入另一侧子宫角内，两侧子宫角各输精0.1mL6.9.4.6通过腹腔镜探头观察在子宫角外侧是否有白色或乳白色的突起，注射精液是否顺畅。如有突起，注入精液不畅，说明针尖扎入子宫角内膜肌层内，应拔出输精枪针尖，选择位置重新再扎。6.9.4.7输精结束后，取出输精枪、腹腔镜及套管，放入消毒桶内，转交辅助员，准备下次输精使用。6.9.5术后伤口处理6.9.5.1辅助员在完成输精后，肌注鹿醒宁解麻。6.9.5.2在穿刺孔及周围用5%的碘酊消毒。6.9.5.3每只羊肌内注射青霉素2万U/kg3万U/kg,链霉素10mg/kg15mg/kg6.9.5.4若手术操作不慎造成伤口出血，应进行缝合止血后喷涂碘酊消毒处理。6.9.5.5解除母羊保定，放入羊舍留观。7母羊术后管理7.1输精后2h内不应饲喂和饮水，不应剧烈运动或放牧。7.22h后投喂适量青干草和饮水，饮水中可添加1%的电解多维，12h后恢复正常饲喂，第1次釆食要控制饲喂量，为正常量的1/3,以防腹腔内大网膜从创口处鼓出。7.3跟踪观察24h发现异常及时处理。如发现大网膜鼓出，可用生理盐水清理鼓出的大网膜，送回腹内，并进行一针结节缝合处理。7.45d后达到正常水平。圈舍应保持干燥，放牧时避免趟水，减少伤口感染率。8妊娠诊断输精40d后，母羊站立保定，通过兽医B超仪（探头为S3/3.5MHz机械扇扫）在乳房与后腿上部交叉的无毛区域进行探测，检测时将探头与皮肤垂直，压紧，匀速贴皮肤移动。B超仪屏幕上显示出孕囊即判断羊怀孕；未检测出孕囊即判断羊未孕。9信息记录9.1信息登记

9DB65/T4497—2022记录母羊品种、序号、发情日期、卵巢状况、输精时间、输精剂量、妊娠诊断、术者信息等内容。输精记录表参见附录B9.2繁殖效率根据信息记录内容，同期发情率按公式U)计算，受胎率按公式2)计算，产羔率按公式3)计算。Y=IX100%⑴式中:V同期发情率，单位为％;X同一时期内发情母羊数，单位为只;Z繁殖母羊数，单位为只。C=-x100%⑵式中:C受胎率,单位为％;A受胎母羊数，单位为只;B配种母羊数，单位为只。G=-x100%⑶式中:G煉产羔率，单位为％;E出生羔羊数，单位为只;F-产羔母羊数，单位为只。

10DB65/T4497—2022附录A(资料性）表A.1羊腹腔镜定时输精主要器械与设备序号项目名称规格单位数量注射器20mL,30mL个各20输精器械2精液试管50mL,100mL个各203生物显微镜(4x10)倍台4带气孔穿剌套管0.5cm支5穿刺针套管0.5cm支6腹腔镜专用支7输精枪专用支28输精枪外套管专用支109长柄钳专用把10输精设备消毒桶直径10cm、高50个11小型塑料或金属充气泵3Pa台套12充气泵链接软管硬胶质213解冻杯温控个14充电器专用个215腹腔镜光源电池专用节616恒温水浴锅4孔台17温度计100°C支4618毛剪16cm24cm把219外科剪圆头、尖头把4620活动刀柄4号把、221刀片20#-23#个若干22解剖刀14cm18cm把223止血钳弯头、直头把46手术器械24持针器专用把225手术镊带齿、不带齿把2426缝合针A型、1/2弧型、3/8弧型和半弯型个若干27缝合线丝线、肠线盒若干28创巾30cmx70cm个若干29移动保定架120cmx60cmx80cm台3530液氮罐YDS-30个31鼓风干燥箱80cmx80cmx100cm台32高压灭菌锅HVE-5050L台其他33塑料细管0.25mL个若干34恒温台20cmx20cmx30cm台35兽医B超仪S3/3.5MHz台7

11DB65/T4497—2022表A.1羊腹腔镜定时输精主要器械与设备（续)序号项R名称规格单位数量360.9%WNaCl溶液500mL瓶51037孕酮海绵栓或阴道栓CIDR)含;35mg氟孕酮个若干38速眠新1.5mLx10盒39鹿醒宁1.5mLx10盒40青霉素2.5gx20盒41链霉素2.5gx20盒42破伤风药0.75mLx10盒43盐酸利多卡因10mLx10盒药品及试剂44肾上腺素1mLx10盒45阿托品1mLx5盒4675%酒精500mL瓶810475%碘酊500mL瓶81048抗生素2.5gx20瓶810490.1%新洁尔灭溶液500mL瓶81050纱布5cmx7cmx8cm包若干51药棉25g包若干8

12DB65/T4497—2022附录B(资料性）表B.1母羊输精记录表序号群号母羊号公羊号发情日期卵巢状况输精时间输精剂量术者返情曰期妊娠诊断备注9