DB65∕T 4073-2017 成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程(新疆维吾尔自治区)

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1、ICS65.020.30B43DB65吾新疆维主~尔自J口区地方标准DB65/T4073-2017成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程Technicaloperationproceduresforinvitroembryoproductionofadultsheep2017-11一10发布2017一12-10实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布DB65/T4073--2017目IJ1=1本标准按照GB/T1.1-2009((标准化工作导则第l部分:标准的结构和编写》的要求制定。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅提出。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。本标准起草单位:新疆畜

2、牧科学院生物技术研究所(新疆畜牧科学院中国·澳大利亚绵羊育种研究中心)、新疆维吾尔自治区畜牧总站、新疆华牛天俊种畜繁育工程有限公司。本标准起草人:汪立芹、耿娟、林嘉鹏、吴阳升、卢全晨、卫新瑛、韩冰、阿米娜·阿布都瓦力、唐森、张建光、牛志刚、黄俊成。D865/T4073--2017成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程1范围本标准规定了供体绵羊的选择与饲养管理、激素处理、手术法活体采卵、屠宰后摘取卵巢采卵、体外受精、体外培养的技术操作规程。本标准适用于供体绵羊体外胚胎生产技术操作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用

3、于本文件。凡是不注日期的引周文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T5458液氮生物容器NY/T1571羊胚胎移植技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.11共体donor可用于胚胎生产的绵羊。3.2绵羊体外胚胎生产invitroembryoproductior指对母体进行激素处理，通过活体采卵或屠宰场摘取卵巢后采集卵母细胞，在体外条件下对卵母细胞进行成熟培养、体外受精、体外培养，获得可用的胚胎，并将胚胎移植至同期发情受体，或冷冻的过程。4供体绵羊的选择与饲养管理4.1选择条件按照NY/T1571对供体羊进行选择，并符合下列要求:a)品种

4、优良，符合品种外貌特征、谱系清楚的二级以上的羊;b)1.5至6周岁:c)产后空怀90d以上，至少有2次以上正常发情周期:d)体质健壮，繁殖机能正常，无遗传疾病、生殖系统疾病和传染性疫病。D865/T4073--20174.2饲养管理a)保持饲养环境卫生、温湿度适宜，尽可能减少或避免应激反应:b)制定合理的日粮配方;c)饮水清洁卫生;d)激素处理前2个月加强词养管理，井适量补充维生素A、维生素D、维生素Eo5供体绵羊的激素处理5.1药品所需药品见附录Ao5.2激素处理方法放入海绵栓或CIDR(含孕激素阴道栓)之日，作为发情周期的第0天，在第9天开始注射FSH，每天早、晚

5、各注射1次，中间间隔约12h，连续3d，递减注射。注射第6次后间隔12h，对供体绵羊回收卵母细胞后取出海绵栓。参见附录Bo6手术法活体采卵、屠宰后摘取卵巢采卵6.1手术法活体采卵手术部位在离乳房前端约2cm处，腹中线大约6cm的左啊1~或右侧位置，按下列要求执行:a)注射第5次FSHa才开始空腹(于术前空腹24h)，禁饮禁食:b)麻醉及保定:根据绵羊体重，肌肉注射静松灵0.3mL~0.5mL，将其仰卧在手术架上并用绳索保定:c)使用肥皂水湿润手术部位的羊毛，刮毛刀刮去羊毛，并用水清洗干净:d)用2%~4%腆田丁消毒手术部位，并停留5min;e)用75%酒精对于术部位脱

6、腆、晾干:f)于术创布覆盖羊体:g)避开血管，用手术刀纵向切开3mm~5mm长的刀r.J，将皮下结缔组织分离，暴露肌膜。再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性分离:h)食指和中指从刀口进入，在骨盆腔、耻骨前沿触摸子宫角，并将子宫、卵巢引出刀口外:j)用吸有抽卵液的10mL注射器抽取突出卵巢表面的卵泡，边缘用纱布止血。回收卵泡液约6mL左右时，推入经抽卵液湿润的圆底试管，并放入3TC7.k浴锅沉淀:j)在体视镜下捡出所有卵母细胞。6.2屠宰后摘取卵巢采卵a)注射FSH第6次后的12h，将待屠宰羊拉至屠宰场屠宰:b)在3TC水浴锅中预热生理盐水，并在生理盐水中加入青霉素和链霉素各

7、半瓶，倒入保温杯:c)将屠宰1h内的卵巢用剪刀剪下，放入保温杯中，运回实验室内:d)在实验室内完成后期的所有操作:e)用剪刀将卵巢周围的结缔组织去除干净，380C生理盐水清洗卵巢3次，并浸泡于生理盐水中:f)用吸水纸吸附卵巢上的盐水，再用吸有抽卵液的注射器抽吸突出卵巢表面的卵泡:2D865/T4073--2017g)将抽完卵泡的卵巢至于60mm平lIIl内，在平皿内加入2mL抽卵液，用刀片密集划破卵巢表层，并在抽卵液中涮洗:h)在体视镜下捡出所有卵母细胞;7卵母细胞的体外成熟培养将捡出的卵母细胞用干净的抽卵液洗涤3次，再用IVM液(卵母细胞成熟培养液