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《T∕QMHIPA 002-2022 功能性蛤蜊肽粉》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
ICS67.120.30C1491体团标准T/QMHIPA002-2022功能性蛤蚓月太粉FunctionalClamPeptidePowder2022-8-3发布2022-8-3实施全国团体标准信息平台青岛市医养健康产业促进会发布
1目IJr=I本标准按照GB/T1.1-2009、GB/T20001.10-2014给出的规则起草。本标准由背岛琛蓝健康产业集团有限公司提出.本标准由青岛市医养健康产业促进会归口。本标准起草单位:青岛琛蓝健康产业集团有限公司、青岛市海洋营养与健康创新食品研究院、青岛博智汇力生物科技有限公司、青岛弘海生物技术有限公司本标准主要起草人:邹圣灿、李八方、刘自民、丁伟、王尚龙、薛长湖、张斌、彭睿本标准属首次发布.全国团体标准信息平台11
2功能性蛤蚓肤粉l范围本标准规定了功能性蛤蝴肤粉的定义、技术要求、试验方法、检验规则、标志、标签、包装、贮:ff.和运输。本标准适用于功能性蛤州肤粉的生产、检验和l销售.2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件.ltlil新版本(包括所有的修改1)).)适用于本文件.GBfT191包装储运图示标志GB2733食品安全国家标准鲜、'*、动物性水产品GB2760食品安全国家标准食品添加剂使用标准GB2762食品安全国家标准食品中污染物限GB2763食品安全国家标准食品中农药敢大残留限量GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总V!IJGB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠杆菌计数GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.7食品安全国家标准食品微生物学检验副浴血性弧菌检验GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄J:j(商价验GB4806.7食品安全国家标准食品接触用塑料材料及市1)品GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB5009.11食品安全国家标准食品中总刑及无机网的测定GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定GB5009.15食品安全国家标准食品中锅的测定GB全国团体标准信息平台5009.17食品安全国家标准食品中总京及有机柔的测定GB5009.123食品安全国家标准食品中格的测定GB5749生活饮用水卫生标准GB斤6543运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱GB7718食品安全国家标准预包装食品标签边则1
3GB9683复合食品包装袋卫生标准GB10136食品安全国家标准动物性水产制品GB14881食品安全国家标准食品生产通用卫生规范GB斤22729海洋鱼低聚肤粉GB28050食品安全国家标准预包装食品营养标签通则GB28118食品包装用塑料与铝街复合膜、袋GB29921食品安全国家标准食品中致病菌限量GB/T30642食品抽样检验通用导则JJF1070定量包装商品净含量计算检验规则国家质量监督检验检疫总局令第75号(2005)<<定量包装商品计量监督管理办法》国家质量监督检验检疫总局令(2009)第123号《国家质量监督检验检疫总局关于修改〈食品标识管理规定〉的诀定》3定义下列定义适用于本标准.功能性蛤蚓陈粉以蛤蚓肉为原料,经酶解法生产的、相对分子质量低于1000u的肤为主要成分的粉末状产品。该产品具有体外抑制血管紧张素转化酶(AngiotensinConvertingEnzyme.ACO的作用等活性.4要求4.1原辅料要求4.1.1始蝴应符合GB2733、GB2762及国家有关汹药残留限量规定.4.1.2生产用水应符合GB5749规定的主要求.4.2感官要求产品的感官应符合表l规定.全国团体标准信息平台表l感官要求项目要求色泽英臼色至浅黄色形态粉末状,尤结块杂质无if常视)J可见外米杂质2
4滋、气味具有丰品特有的气昧与滋味4.3理化指标产品的理化指标应符合表2规定。表2理化指标项目指你蛋臼质15副溶血性弧菌I(MPN/g)511001000金黄色葡商球菌I(CFUlg)511001000.样品的分析及处理按照Gß4789.1执行.4.6体外ACE抑制率指标产品的体外ACE抑制率IC,o运2.00mglmL.4.7生产加工过程应符合GB14881的要求.4.8净含量应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。4.9其他污染物限量应符合GB2762、GB2763的规定.4.9食品添加剂4.9.1食品添加剂质量应符合相应的标准和有关规定.4.9.2食品添加剂的品种和使用量应符合GB2760有关规定。5试验方法5.1感官在自然光下,称取IOg样品平摊子消洁、干燥的白色缸'曾ì:ff.t中,色泽、形态和杂质采用肉眼观察,气味采用l嗅阔,滋味采用口尝。5.2理化5.2.1蛋白质按照GB5009.5规定的凯氏定氮法测定,蛋白换算系数为6.25.5.2.2低聚歇按照全国团体标准信息平台GB/T22729中6.3规定的方法测定。5.2.3相对分子质量小于1000u的蛋臼质水解所占比例按照附录A规定的方法测定.5.2.4水分46按照GB5009.3规定的方法测定.5.2.5灰分按照GB5009.4规定的方法测定-5.3污染物5.3.1甲基柔按照GB5009.17规定的方法测定.5.3.2~自按照GB5009.12规定的方法测定-5.3.3无机冽按照GB5009.11规定的方法测定.5.3.4锅按照GB5009.15规定的方法测定.5.3.5络按照GB5009.123规定的方法测定.5.4微生物5.4.1菌落总数按照GB4789.2规定的方法测定.5.4.2大肠杆菌按照GB4789.3平板计数法规定的方法测定.5.4.3沙门氏菌按照GB4789.4规定的方法测定-5.4.4副溶血性弧菌按照全国团体标准信息平台GB4789.7规定的方法测定-5.4.5金黄色葡萄球菌按照GB4789.10第二法规定的方法测定。5.5体外ACE抑制率57按照附录B规定的方法测定.5.6净含量检验方法按照JJF1070规定的方法进行6检验规则6.1入库检验原辅料、包装材料须经本企业质量部门检验合格或验证供货方提供的检验合格证明后方可入库.6.2抽样6.2.1组m同一批原料、同一生产线连续产出为一个生产批次.6.2.2抽样为j圭和数量从每批产品中随机抽取不少于5个最小包装单位样品,然后,用取样工具伸入每袋的3/4处,所取试样不应少于100g.抽样应符合GBrr30642规定.微生物抽样按GB4789.1规定的三级采样方案采集样品.6.3出厂险验产品出厂须经本企业质量检验部门按本标准检验合格,签发合格证后方可出厂.出厂检验项目为感官指标、蛋白质、水分、灰分、相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例、菌f6总数、大肠菌君羊和沟含量.6.4型式检验检验项目为本标准要求中规定的全部项目.一般情况下,型式检验半年进行一次.有下列情况之一时,亦应进行型式检验.a)产品定型投产时,b)停产6个月以上恢复生产时:c)更换主要生产设备、主要原辅材料或更改关键工艺可能影响产品质量时:d)出厂检验与上次型式检验差异较大时和质监部门认为有必要时:e)供需双方对产品质量有争议,请第三方进行仲裁时,f)全国团体标准信息平台国家食品安全监督管理部门提出要求时.6.5判定规则6.5.1所俭项目的检验结果全部符合标准要求时,判该批产品合格-6.5.2微生物指标和污染物指标有一项不合格时,则如H革批产品不合格,并不应复检.686.5.3感官要求及理化指标,当超过3项不合格时,则判定该批产品不合格,并不应复检:当不超过3项不合格时,可加倍抽样对不合格项目进行复捡,复检结果仍有1项或1项以上项目不合格,则判该批产品不合格。7标志、标签、包装、运输、贮存7.1标志、标签7.1.1标志应消晰、牢固。标签应符合GB7718、GB28050和《食品标识管理规定》的规定.7.1.2包装储运图示标志应符合GB/T191规定。7.2包装产品内包装用PE袋或铝塑复合袋,内包装应符合GB9683、GB28118或GB4806.7的规定,袋口封闭严实,外包装用纸盒、牛皮纸袋、瓦楞纸箱或纸板桶,瓦楞纸箱应符合GB厅6543的规定.客户如另有需求,在符合运输、贮存及食品卫生要求的情况下,可旅客户要求进行不同形式、材质、亟莹的包装。7.3运输运输中应防止受潮、日晒,运输工具应干湾、卫生,防止与有毒、有害、有异味物质混运.7.4贮存7.4.1产品不应露天堆放.产品仓库应消洁、干燥、通风,无鼠虫害.7.4.2产品堆放应有垫板,离地lOcm以上,离墙20cm以上.7.4.3产品不应与有毒、有害、有异味、易腐败变质或潮湿的物品同仓库存放.7.4.4产品自生产之日起,在本标准规定的包装、运输、贮存条件下,保质J的24个月.全国团体标准信息平台79附录A(规范性附录)相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例的测定A.l方法提要采用高效体积排阻色谱法测定.即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别j挂行分离,在肤键的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用相对分子质量分布测定的专用数据处理软件(UPGPC软件).对标准品和样品的色谱阁及其数掘进行处理,根据相对分子质量校正曲线方程,计算得到始蚓肤的相对分子质盘大小及分布范围.A.2试1fiJA.2.1乙膀:包谱纯.A.2.2三氟乙酸:分析纯。A.2.3*,GB/T6682规定的一级水.A.2.4相对分子质量校正曲线所用标准品:a)细胞包索C(cytochromeC.MW12384);b)仰肤酶(aprotinin.MW6512);c)杆菌酶(bacitracin.MW1423);d)乙氨酸-乙氨酸-黯氨酸.精氨酸(MW451);e)乙氨酸乙氨酸-乙氨酸(MW189).A.3仪器和设备A.3.1高效液相色谱仪配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站A.3.2流动相真空抽滤脱气装置.A.3.3超声波振荡器。A.3.4分析天平:感盘0.0001g.A.4色i全国团体标准信息平台曹条件与系统适应性实验A.4.1色谱柱T5Kge1G20005WXL300mmX7.8mm(GELLOT502R)或性能与此相近的同类型其他适用于测定肤的分子量分布的凝胶柱.A.4.2流动相.乙腊*,三氟乙酸,体积tt为40,60,0.05.A.4.3检测波长220nm.E10A.4.4流速0.5mL/minoA.4.5柱温30"C。A.4.6进样体积10μLoA.4.7为使色谱系统符合检测要求,规定在上述色谱条件下•i.疑胶色谱柱的柱效~n理论培饭数(N)按三肤标准晶(乙氨酸,乙氨酸-乙氨酸)峰计算不低于5000.蛋臼肤的分配系数(K.)应在0-1之间.A.5相对分子质量校正曲线制作分别用流动相配制成浓度为1.0g/L左右的上述不同相对分子质量的肤标准品溶液,用孔径为0.2I.1m-0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别i茸样,得到系列标准品的色谱阁.以相对分子质量的对数11附录B(规范性附录)功能性始蚓肤粉ACE抑制率IC"的测定B.I为法提要始剿肤参与ACE与HHL的酶解反应并抑制ACE活性,反应液过滤后,采用高效液相色谱法测定.即以多孔土豆料十八炕基硅胶校为固定相,依据马尿殷(HA)在色谱柱中的特定保阳时间,在HA的特征紫外吸收波长228nm条件下检测加入肤粉溶液前后HA的生成盘来计算蛤蝴肤对ACE酶活的抑制率.B.2试~JB.2.1乙暗色谱纯B.2.2三氟乙酸:色谱纯B.2.37K:GBrr6628规定的一级水.B.2.4市IJ各反应样液所需其他试剂及标准品:a)血管紧张素转化酶(angiotensinconveningen勾me.ACE)b)马尿酸(hippuricacid.HA.MW179.17)c)马尿酷占组氮酌-亮氨殷(N-Hippuryl-His-Leuhydrate.HHL•MW428.46)d)O.IMHCI标准液B.2.5棚酸·分析纯B.2.6棚砂分析纯B.2.7氮化纳:分析纯B.3仪器和设备6.3.1高效液相色谱仪.配有紫外检测器.6.3.2流动相真空抽滤脱气装置.6.3.3超声波振荡器。6.3.4分析天平全国团体标准信息平台·感量0.0001g.6.3.5恒混水浴锅.6.3.6旋涡振荡器。6.3.7pHì:十.10128.4色i营条件与系统适应性实验6.4.1色谱柱ZOR6AXEclipseXD6-C18分析m包谱柱(4.6mmX250mm)或性能与此相近的同类型其他适用于测定马尿酸含量的硅胶柱.6.4.2流动相:乙脂.水(含0.05%三氟乙酸),体积比为25:75.6.4.3检测波长228nm.6.4.4流速0.5mL/min.8.4.5柱温,室温.6.4.6进样体积20μL.8.5样品制备6.5.1棚酸锅缓冲液的配制(O.lmoI/L),精确称取12.37g棚酸和19.07g锄砂,分别加水加热溶解后动容到1l备用。量取175mL棚砂溶液与325mL棚酸溶液充分混匀,用。1mollL的HCIl\1i.NaOH调节pH值至8.3,接后加17.532g的氯化纳定容到IL.B.5.2HA标准溶液配制称取179.17mg的HA标准品(精确至O.OOOlg)加水定容至1.0L.配制成浓度为1mmol/L的标准液。B.5.3ACE酶液及HHL底物溶液的配制ACE和HHL分别用5.1配制的缓冲溶液浴成O.lU/mL和5mmol/L的溶液,-20'C冰箱冻存.B.5.4肤粉溶液配制:分别称取肤粉样品。。挝、O.lg、2g、4g、6g、8g、lOg(精确至O.OOOlg),各自用容量瓶定容到100mL.得到浓度为0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,1O.0mg/mLB13DU-(-AH-RU俨)iw-VA=X咱nunu-A式中:X-i式样的ACE抑制率.%:A-实验组试样图谱中的HA峰面积:B-对照组试样图谱中的HA峰面积.C一空白组试样图谱中的HA峰面积。当平行测定符合精密度所规定的要求时,取平行测定的算术平均值作为结果,精确iiJ0.01%0以待测肤粉溶液浓度为横坐标,以ACE抑制率为纵坐标,建立浓度与抑制率的线性方程,计算半抑制浓度IC500全国团体标准信息平台12
5副溶血性弧菌I(MPN/g)511001000金黄色葡商球菌I(CFUlg)511001000.样品的分析及处理按照Gß4789.1执行.4.6体外ACE抑制率指标产品的体外ACE抑制率IC,o运2.00mglmL.4.7生产加工过程应符合GB14881的要求.4.8净含量应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。4.9其他污染物限量应符合GB2762、GB2763的规定.4.9食品添加剂4.9.1食品添加剂质量应符合相应的标准和有关规定.4.9.2食品添加剂的品种和使用量应符合GB2760有关规定。5试验方法5.1感官在自然光下,称取IOg样品平摊子消洁、干燥的白色缸'曾ì:ff.t中,色泽、形态和杂质采用肉眼观察,气味采用l嗅阔,滋味采用口尝。5.2理化5.2.1蛋白质按照GB5009.5规定的凯氏定氮法测定,蛋白换算系数为6.25.5.2.2低聚歇按照全国团体标准信息平台GB/T22729中6.3规定的方法测定。5.2.3相对分子质量小于1000u的蛋臼质水解所占比例按照附录A规定的方法测定.5.2.4水分4
6按照GB5009.3规定的方法测定.5.2.5灰分按照GB5009.4规定的方法测定-5.3污染物5.3.1甲基柔按照GB5009.17规定的方法测定.5.3.2~自按照GB5009.12规定的方法测定-5.3.3无机冽按照GB5009.11规定的方法测定.5.3.4锅按照GB5009.15规定的方法测定.5.3.5络按照GB5009.123规定的方法测定.5.4微生物5.4.1菌落总数按照GB4789.2规定的方法测定.5.4.2大肠杆菌按照GB4789.3平板计数法规定的方法测定.5.4.3沙门氏菌按照GB4789.4规定的方法测定-5.4.4副溶血性弧菌按照全国团体标准信息平台GB4789.7规定的方法测定-5.4.5金黄色葡萄球菌按照GB4789.10第二法规定的方法测定。5.5体外ACE抑制率5
7按照附录B规定的方法测定.5.6净含量检验方法按照JJF1070规定的方法进行6检验规则6.1入库检验原辅料、包装材料须经本企业质量部门检验合格或验证供货方提供的检验合格证明后方可入库.6.2抽样6.2.1组m同一批原料、同一生产线连续产出为一个生产批次.6.2.2抽样为j圭和数量从每批产品中随机抽取不少于5个最小包装单位样品,然后,用取样工具伸入每袋的3/4处,所取试样不应少于100g.抽样应符合GBrr30642规定.微生物抽样按GB4789.1规定的三级采样方案采集样品.6.3出厂险验产品出厂须经本企业质量检验部门按本标准检验合格,签发合格证后方可出厂.出厂检验项目为感官指标、蛋白质、水分、灰分、相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例、菌f6总数、大肠菌君羊和沟含量.6.4型式检验检验项目为本标准要求中规定的全部项目.一般情况下,型式检验半年进行一次.有下列情况之一时,亦应进行型式检验.a)产品定型投产时,b)停产6个月以上恢复生产时:c)更换主要生产设备、主要原辅材料或更改关键工艺可能影响产品质量时:d)出厂检验与上次型式检验差异较大时和质监部门认为有必要时:e)供需双方对产品质量有争议,请第三方进行仲裁时,f)全国团体标准信息平台国家食品安全监督管理部门提出要求时.6.5判定规则6.5.1所俭项目的检验结果全部符合标准要求时,判该批产品合格-6.5.2微生物指标和污染物指标有一项不合格时,则如H革批产品不合格,并不应复检.6
86.5.3感官要求及理化指标,当超过3项不合格时,则判定该批产品不合格,并不应复检:当不超过3项不合格时,可加倍抽样对不合格项目进行复捡,复检结果仍有1项或1项以上项目不合格,则判该批产品不合格。7标志、标签、包装、运输、贮存7.1标志、标签7.1.1标志应消晰、牢固。标签应符合GB7718、GB28050和《食品标识管理规定》的规定.7.1.2包装储运图示标志应符合GB/T191规定。7.2包装产品内包装用PE袋或铝塑复合袋,内包装应符合GB9683、GB28118或GB4806.7的规定,袋口封闭严实,外包装用纸盒、牛皮纸袋、瓦楞纸箱或纸板桶,瓦楞纸箱应符合GB厅6543的规定.客户如另有需求,在符合运输、贮存及食品卫生要求的情况下,可旅客户要求进行不同形式、材质、亟莹的包装。7.3运输运输中应防止受潮、日晒,运输工具应干湾、卫生,防止与有毒、有害、有异味物质混运.7.4贮存7.4.1产品不应露天堆放.产品仓库应消洁、干燥、通风,无鼠虫害.7.4.2产品堆放应有垫板,离地lOcm以上,离墙20cm以上.7.4.3产品不应与有毒、有害、有异味、易腐败变质或潮湿的物品同仓库存放.7.4.4产品自生产之日起,在本标准规定的包装、运输、贮存条件下,保质J的24个月.全国团体标准信息平台7
9附录A(规范性附录)相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例的测定A.l方法提要采用高效体积排阻色谱法测定.即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别j挂行分离,在肤键的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用相对分子质量分布测定的专用数据处理软件(UPGPC软件).对标准品和样品的色谱阁及其数掘进行处理,根据相对分子质量校正曲线方程,计算得到始蚓肤的相对分子质盘大小及分布范围.A.2试1fiJA.2.1乙膀:包谱纯.A.2.2三氟乙酸:分析纯。A.2.3*,GB/T6682规定的一级水.A.2.4相对分子质量校正曲线所用标准品:a)细胞包索C(cytochromeC.MW12384);b)仰肤酶(aprotinin.MW6512);c)杆菌酶(bacitracin.MW1423);d)乙氨酸-乙氨酸-黯氨酸.精氨酸(MW451);e)乙氨酸乙氨酸-乙氨酸(MW189).A.3仪器和设备A.3.1高效液相色谱仪配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站A.3.2流动相真空抽滤脱气装置.A.3.3超声波振荡器。A.3.4分析天平:感盘0.0001g.A.4色i全国团体标准信息平台曹条件与系统适应性实验A.4.1色谱柱T5Kge1G20005WXL300mmX7.8mm(GELLOT502R)或性能与此相近的同类型其他适用于测定肤的分子量分布的凝胶柱.A.4.2流动相.乙腊*,三氟乙酸,体积tt为40,60,0.05.A.4.3检测波长220nm.E
10A.4.4流速0.5mL/minoA.4.5柱温30"C。A.4.6进样体积10μLoA.4.7为使色谱系统符合检测要求,规定在上述色谱条件下•i.疑胶色谱柱的柱效~n理论培饭数(N)按三肤标准晶(乙氨酸,乙氨酸-乙氨酸)峰计算不低于5000.蛋臼肤的分配系数(K.)应在0-1之间.A.5相对分子质量校正曲线制作分别用流动相配制成浓度为1.0g/L左右的上述不同相对分子质量的肤标准品溶液,用孔径为0.2I.1m-0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别i茸样,得到系列标准品的色谱阁.以相对分子质量的对数11附录B(规范性附录)功能性始蚓肤粉ACE抑制率IC"的测定B.I为法提要始剿肤参与ACE与HHL的酶解反应并抑制ACE活性,反应液过滤后,采用高效液相色谱法测定.即以多孔土豆料十八炕基硅胶校为固定相,依据马尿殷(HA)在色谱柱中的特定保阳时间,在HA的特征紫外吸收波长228nm条件下检测加入肤粉溶液前后HA的生成盘来计算蛤蝴肤对ACE酶活的抑制率.B.2试~JB.2.1乙暗色谱纯B.2.2三氟乙酸:色谱纯B.2.37K:GBrr6628规定的一级水.B.2.4市IJ各反应样液所需其他试剂及标准品:a)血管紧张素转化酶(angiotensinconveningen勾me.ACE)b)马尿酸(hippuricacid.HA.MW179.17)c)马尿酷占组氮酌-亮氨殷(N-Hippuryl-His-Leuhydrate.HHL•MW428.46)d)O.IMHCI标准液B.2.5棚酸·分析纯B.2.6棚砂分析纯B.2.7氮化纳:分析纯B.3仪器和设备6.3.1高效液相色谱仪.配有紫外检测器.6.3.2流动相真空抽滤脱气装置.6.3.3超声波振荡器。6.3.4分析天平全国团体标准信息平台·感量0.0001g.6.3.5恒混水浴锅.6.3.6旋涡振荡器。6.3.7pHì:十.10128.4色i营条件与系统适应性实验6.4.1色谱柱ZOR6AXEclipseXD6-C18分析m包谱柱(4.6mmX250mm)或性能与此相近的同类型其他适用于测定马尿酸含量的硅胶柱.6.4.2流动相:乙脂.水(含0.05%三氟乙酸),体积比为25:75.6.4.3检测波长228nm.6.4.4流速0.5mL/min.8.4.5柱温,室温.6.4.6进样体积20μL.8.5样品制备6.5.1棚酸锅缓冲液的配制(O.lmoI/L),精确称取12.37g棚酸和19.07g锄砂,分别加水加热溶解后动容到1l备用。量取175mL棚砂溶液与325mL棚酸溶液充分混匀,用。1mollL的HCIl\1i.NaOH调节pH值至8.3,接后加17.532g的氯化纳定容到IL.B.5.2HA标准溶液配制称取179.17mg的HA标准品(精确至O.OOOlg)加水定容至1.0L.配制成浓度为1mmol/L的标准液。B.5.3ACE酶液及HHL底物溶液的配制ACE和HHL分别用5.1配制的缓冲溶液浴成O.lU/mL和5mmol/L的溶液,-20'C冰箱冻存.B.5.4肤粉溶液配制:分别称取肤粉样品。。挝、O.lg、2g、4g、6g、8g、lOg(精确至O.OOOlg),各自用容量瓶定容到100mL.得到浓度为0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,1O.0mg/mLB13DU-(-AH-RU俨)iw-VA=X咱nunu-A式中:X-i式样的ACE抑制率.%:A-实验组试样图谱中的HA峰面积:B-对照组试样图谱中的HA峰面积.C一空白组试样图谱中的HA峰面积。当平行测定符合精密度所规定的要求时,取平行测定的算术平均值作为结果,精确iiJ0.01%0以待测肤粉溶液浓度为横坐标,以ACE抑制率为纵坐标,建立浓度与抑制率的线性方程,计算半抑制浓度IC500全国团体标准信息平台12
11附录B(规范性附录)功能性始蚓肤粉ACE抑制率IC"的测定B.I为法提要始剿肤参与ACE与HHL的酶解反应并抑制ACE活性,反应液过滤后,采用高效液相色谱法测定.即以多孔土豆料十八炕基硅胶校为固定相,依据马尿殷(HA)在色谱柱中的特定保阳时间,在HA的特征紫外吸收波长228nm条件下检测加入肤粉溶液前后HA的生成盘来计算蛤蝴肤对ACE酶活的抑制率.B.2试~JB.2.1乙暗色谱纯B.2.2三氟乙酸:色谱纯B.2.37K:GBrr6628规定的一级水.B.2.4市IJ各反应样液所需其他试剂及标准品:a)血管紧张素转化酶(angiotensinconveningen勾me.ACE)b)马尿酸(hippuricacid.HA.MW179.17)c)马尿酷占组氮酌-亮氨殷(N-Hippuryl-His-Leuhydrate.HHL•MW428.46)d)O.IMHCI标准液B.2.5棚酸·分析纯B.2.6棚砂分析纯B.2.7氮化纳:分析纯B.3仪器和设备6.3.1高效液相色谱仪.配有紫外检测器.6.3.2流动相真空抽滤脱气装置.6.3.3超声波振荡器。6.3.4分析天平全国团体标准信息平台·感量0.0001g.6.3.5恒混水浴锅.6.3.6旋涡振荡器。6.3.7pHì:十.10
128.4色i营条件与系统适应性实验6.4.1色谱柱ZOR6AXEclipseXD6-C18分析m包谱柱(4.6mmX250mm)或性能与此相近的同类型其他适用于测定马尿酸含量的硅胶柱.6.4.2流动相:乙脂.水(含0.05%三氟乙酸),体积比为25:75.6.4.3检测波长228nm.6.4.4流速0.5mL/min.8.4.5柱温,室温.6.4.6进样体积20μL.8.5样品制备6.5.1棚酸锅缓冲液的配制(O.lmoI/L),精确称取12.37g棚酸和19.07g锄砂,分别加水加热溶解后动容到1l备用。量取175mL棚砂溶液与325mL棚酸溶液充分混匀,用。1mollL的HCIl\1i.NaOH调节pH值至8.3,接后加17.532g的氯化纳定容到IL.B.5.2HA标准溶液配制称取179.17mg的HA标准品(精确至O.OOOlg)加水定容至1.0L.配制成浓度为1mmol/L的标准液。B.5.3ACE酶液及HHL底物溶液的配制ACE和HHL分别用5.1配制的缓冲溶液浴成O.lU/mL和5mmol/L的溶液,-20'C冰箱冻存.B.5.4肤粉溶液配制:分别称取肤粉样品。。挝、O.lg、2g、4g、6g、8g、lOg(精确至O.OOOlg),各自用容量瓶定容到100mL.得到浓度为0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,1O.0mg/mLB13DU-(-AH-RU俨)iw-VA=X咱nunu-A式中:X-i式样的ACE抑制率.%:A-实验组试样图谱中的HA峰面积:B-对照组试样图谱中的HA峰面积.C一空白组试样图谱中的HA峰面积。当平行测定符合精密度所规定的要求时,取平行测定的算术平均值作为结果,精确iiJ0.01%0以待测肤粉溶液浓度为横坐标,以ACE抑制率为纵坐标,建立浓度与抑制率的线性方程,计算半抑制浓度IC500全国团体标准信息平台12
13DU-(-AH-RU俨)iw-VA=X咱nunu-A式中:X-i式样的ACE抑制率.%:A-实验组试样图谱中的HA峰面积:B-对照组试样图谱中的HA峰面积.C一空白组试样图谱中的HA峰面积。当平行测定符合精密度所规定的要求时,取平行测定的算术平均值作为结果,精确iiJ0.01%0以待测肤粉溶液浓度为横坐标,以ACE抑制率为纵坐标,建立浓度与抑制率的线性方程,计算半抑制浓度IC500全国团体标准信息平台12
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