血液病交流ppt课件

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血液肿瘤临床检测项目简介张卿

1集团宗旨集团构成北京海思特临床检验所武汉康圣达医学检验所复旦新培晶临床分子研究中心上海美众临床检验中心融恒环球基因技术（北京）临床检验所香港标准病理检验所康圣环球医学特检集团简介

2MICM分型原则中各检测技术简介各检测项目标本要求及注意事项血液肿瘤初诊检测方案建议血液肿瘤治疗后残留检测建议内容简介

3一、MICM分型原则中各检测技术简介实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及更为重要的掌握这类实验技能并具有血液肿瘤专业知识的血液病理学医师。

4MICM分型发展由来MICM分型原则中各检测技术简介

5MICM分型相应检测技术MICM分型原则中各检测技术简介

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8免疫学I——流式细胞术免疫分型T细胞系（CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3等）B细胞系（CD10、CD19、CD20、CD22、cIgm、cCD79a等）粒细胞系（CD13、CD15、CD33、CD64、MPO等）单核细胞系（CD13、CD33、CD11b、CD14、CD36等）红细胞系（CD71、GlyA等）其他（混合、双表型、树突、系别不明等）MICM分型原则中各检测技术简介

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10免疫学I——流式细胞术免疫分型系别鉴定可以将急淋分为T-ALL或B-ALL诊断双表型、混合性诊断M0、未分化型等特殊类型白血病髓系分亚型与FAB分亚型有一定差异MICM分型原则中各检测技术简介

11细胞遗传学C——染色体核型分析正常核型：男：46，XY女：46，XX异常核型：46，XY，t(8;21)(q22;q22)46，XX，t(15;17)(q22;q21.1)47,XY,del(6)(q15),+11,-15,add(17)(p13),+mar[16]……MICM分型原则中各检测技术简介

12细胞遗传学C——荧光原位杂交(FISH)FISH——FluorescenceInSituHybridization是目前新兴的遗传学技术原理:采用荧光标记的DNA探针，利用探针与被检测样本中DNA碱基配对的互补性，在探针与样本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出的结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。MICM分型原则中各检测技术简介FISH原理示意图

13细胞遗传学C——荧光原位杂交（FISH）探针类型双色单融合（DualColor,SingleFusion）双色双融合（DualColor,DualFusion）双色分离（DualColor,BreakApart）额外信号（ExtraSignal）建议与染色体核型分析同时送检MICM分型原则中各检测技术简介双色单融合示意图

14细胞遗传学C——荧光原位杂交（FISH）MICM分型原则中各检测技术简介FISH检测可以弥补染色体不足，染色体检测为阴性，FISH可能为阳性。

15分子生物学M——融合基因两个基因或其各自的一部分组合成一个新的能表达的基因，染色体易位产生ABL9号q3422号q119号22号46，XY，t(9;22)(q34;q11)BCRBCR-ABLMICM分型原则中各检测技术简介

16分子生物学M——融合基因BCR/ABL：t(9;22)(q34;q11)PML/RARα：t(15;17)(q22;q21)AML1/ETO：t(8;21)(q22;q22)TEL/AML1：t(12;21)(p13;q22)E2A/PBX1：t(1;19)(q23;p13)……MICM分型原则中各检测技术简介PCR反应原理凝胶电泳检测定性检测定量检测RQ-PCR检测

17分子生物学M——融合基因PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的范围内（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1RT-PCR：可用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因巢式RT-PCR：可显著提高反应的特异性，增加扩增效率RQ-PCR：可定量扩增产物、起始拷贝数MICM分型原则中各检测技术简介

18分子生物学M——基因突变基因突变（genemutation）是由于DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或改变，而引起的基因结构的改变。MICM分型原则中各检测技术简介内含子转录区非编码区非编码区外显子

19分子生物学M——基因突变FLT3/ITD基因突变NPM1基因突变C-KIT基因突变CEBPA基因突变……MICM分型原则中各检测技术简介白血病发生D.GaryGillilandBestPractice&ResearchClinicalHaematology.2003;16:409-417基因突变融合基因“二次打击”学说

20骨髓形态学和流式细胞术免疫分型流式细胞术免疫分型和免疫组化染色体核型分析和FISH融合基因和细胞遗传学FISH与RT-PCRFISH与免疫组化各种检测技术特点比较正常正常正常形态学特点分化阶段免疫表型特点形态学分型？异常分化阶段异常免疫表型

21二、各检测项目标本要求及注意事项

22骨髓形态学/骨髓活检流式细胞术免疫分型：骨髓2-3ml，EDTA抗凝（紫头管）；骨髓干抽时可用外周血代替，但要求外周血内原始细胞>20%，其他同骨髓骨髓染色体核型分析和FISH：骨髓3-5ml，肝素钠抗凝（绿头管）等融合基因/基因突变：骨髓2-3ml，EDTA抗凝（紫头管）各检测项目标本基本要求及注意事项特殊情况的具体标本要求，请向业务负责人联系！

23三、血液肿瘤初诊检测方案建议

24AL——系别不清形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析分子生物学——白血病31种常见融合基因通筛血液肿瘤初诊检测方案建议-AL25个以上抗原，包括粒系、单核系、T系、B系、非系列特异性、干细胞（原始细胞）相关以及其他细胞等各种标志；除可以进行系别鉴定、亚型判断外，还可进行一定的预后评估。可以宏观、全面地检查细胞内所有染色体的各种异常，但对于一些微小异常或隐匿性易位以及低含量的异常难以查出。此外，由于标本本身等各种原因的影响，会有一定比例的无分裂相出现。建议必要时配合行FISH检测。白血病31种融合基因通筛，有利于提高阳性检出率。包括：MLL/AFX、MLL/ELL、MLL/AF1P、MLL/AF17、MLL/AF4、MLL/AF6、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/AF1Q、MLL/ENL、AML1/ETO、TEL/AML1、AML1/MDS1、dupMLL、TEL/PDGFR、TEL/ABL、NPM/ALK、NPM/RARα、PLZF/RARα、PML/RARα、E2A/PBX1、SIL/TAL、SET/CAN、NPM/MLF1、CBFβ/MYH11、DEK/CAN、HOX11、BCR/ABL、TLS/ERG、E2A/HLF、EVL1诊断相关类：AML1/ETO：多见于M2，少见于M4和M1；M2b中最多RARα相关融合基因：M3PML/RARαPLZF/RARαNPM/RARαCBFβ/MYH11：M4Eo用药相关类：BCR/ABL：格列卫PML/RARα：全反式维甲酸（ATRA）NPM/RARα：全反式维甲酸（ATRA）AML1/ETO：大剂量的阿糖胞苷CBFβ/MYH11：大剂量的阿糖胞苷预后良类：AML1/ETOPML/RARαCBFβ/MYH11TEL/AML1NPM突变且FLT3野生型者预后差类：TLS/ERGDEK/CANNPM/MLF1MLL/AF17、MLL/AF10、MLL/ELL、MLL/AF6、MLL/AF4、DupMLLEVI1HOX11E2A/PBX1FLT3基因突变

25ALL——T、B等不清骨髓形态学流式细胞术免疫分型细胞遗传学检测基因诊断——急淋15种常见融合基因筛查或者融合基因BCR/ABL、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL/AF4定量检测血液肿瘤初诊检测方案建议-AL流式细胞术免疫分型：T系：CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3、TCRαβ、TCRγδ等B系：CD10、CD19、CD20、CD22、cIgM、cCD79a等NK系：CD16、CD56、CD57等ALL-FISH套系：t(9;22)：预后极差11q23重排：预后差t(12;21)：预后好+4：预后好+10：预后好ALL融合基因（建议查定量，但个别基因未开展定量检测）：BCR/ABL：预后极差E2A/PBX1：常见于B-ALL，预后不良TEL/AML1：预后较好MLL/AF4：预后不良1p32染色体内微缺失SIL/TAL1：常见于T-ALL

26AML——亚型不清骨髓形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析基因诊断——急非淋15种常见融合基因筛查血液肿瘤初诊检测方案建议-ALFAB分类CD13CD33CD11bCD14HLA-DRCD34CD117MPOM0++/---++++M1++-/+-++++M2++--++/-++M3++----++M4+++++/-+/-++M5a+++/-+/-+/-+-/+M5b+++++-/+M6+/-+/-+或--+/--+M7-+/---++?-AML-FISH套系：t(15;17)：辅助诊断M3inv(16)：常见于M4Eo11q23重排：常见于M5、M4和M1、M2t(8;21)：常见于M25q-：预后差7q-：预后差+8：预后中等或不良t(9;22)：CMLAML重要融合基因或基因突变（融合基因建议查定量）：PML/RARα：M3AML1/ETO：多见于M2CBFβ/MYH11：多见于M4EoFLT3/ITD：阳性则危险度较高NPM1：FLT3野生型时阳性预后好CEBPA：阳性预后好C-kit/D816V：危险度中等

27淋巴瘤白血病形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析/FISH套系基因诊断——TCR基因重排/IgH基因重排/t(11;14)bcl-1-JH融合基因定性/t(14;18)bcl-2-JH融合基因定性血液肿瘤初诊检测方案建议-淋巴瘤白血病CLL-FISH探针：ATM：缺失则中位生存期7-9个月P53：缺失中位生存期为32个月RB1：缺失则中位生存期133个月13q14：缺失则中位生存期133个月D13S2512cen正常FISH组合结果中位生存期111个月淋巴瘤FISH探针：Bcl-2重排t(8;14)：Burkitt’s淋巴瘤t(11;14)：套细胞淋巴瘤Bcl-6重排：弥漫大B淋巴瘤t(11;18)：结外边缘带淋巴瘤t(14;18)：滤泡型淋巴瘤、弥漫大B淋巴瘤IgH重排

28MDS骨髓形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析基因诊断——WT1基因定量、血液肿瘤初诊检测方案建议-MDSMDS-FISH探针套系：20q-：预后好+8：预后中等-7/7q-：预后差-5/5q-：单独则预后好，伴其他则预后差-Y：预后好

29CMPD是一组造血干细胞异常增殖性疾病，在髓细胞普遍增生的基础上有某个系列细胞尤其突出，呈现持续不断地过度增殖，临床上常有肝脾大，尤其以脾大多见，病程缓慢。主要介绍：真性红细胞增多症（PV）原发性血小板增多症（ET）原发性骨髓纤维化（PMF）慢性粒细胞白血病（CML）血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD

30血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD

31血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD红细胞增多JAK2V617F突变筛查JAK2V617F(+)JAK2V617F(-)EPO正常或升高EPO降低JAK2exon12突变JAK2exon12(-)JAK2exon12(+)考虑其他因素：P50测定；EPO受体测定；骨髓活检PV其他因素引起的后天或先天性红细胞增多症PVPV诊断流程

32血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD血小板增多JAK2V617F突变筛查JAK2V617F(+)JAK2V617F(-)骨髓活检或细胞遗传学检查巨核细胞↑；缺乏诊断为PV,PMF,CML,MSD或者髓系肿瘤WHO的标准MPLW515L/K突变MPLW515L/K(+)MPLW515L/K(-)高度怀疑ETET不能排除，考虑其他的因素：细胞遗传学；骨髓活检；缺乏Ph染色体时，应用FISH检测BCR/ABLET诊断流程

33血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD额外骨髓造血的骨髓纤维化JAK2V617F突变筛查JAK2V617F(+)JAK2V617F(-)缺乏诊断为PV,CML,MSD或者髓系肿瘤WHO的标准MPLW515L/K突变MPLW515L/K(+)MPLW515L/K(-)高度怀疑PMFPMF不能排除时，考虑其他的因素：Ph染色体；其他染色体畸形；TPO测定

34疾病融合基因/基因突变临床意义慢性粒细胞白血病BCR/ABL(P210,P230)定性检测可辅助CML的诊断，该基因阳性的患者可用格列卫进行治疗，并可进行疗效监测和微小残留检测BCR/ABL(P210)定量检测真性红细胞增多症JAK2/V617F突变定性/定量检测可辅助CMPD疾病的诊断，可进行疗效监测和微小残留检测原发性骨髓纤维化JAK2exon12突变定性检测原发性血小板增多症MPLW515L/K突变定性/定量检测嗜酸性粒细胞综合征FIP1L1/PDGFRα定性检测ETV6/PDGFRβ定性检测常见于高嗜酸性细胞综合征/嗜酸性细胞白血病，阳性者对格列卫治疗有效血液肿瘤初诊检测方案建议-CMPD

35微小残留病灶指的是疾病集中的部位或是综合病症、感染的主要部位。血液肿瘤微小残留病灶是指血液肿瘤治疗达到完全缓解后，用常规的形态学检测方法不能检测到明显的肿瘤病灶，而此时体内仍存在的少量肿瘤细胞。微小残留病灶是肿瘤复发的直接原因。因此，定期进行微小残留病灶的检测，对于监测疗效、早期发现复发倾向、及时干预、防止复发等方面有很重要的意义。四、血液肿瘤治疗后残留检测建议

36骨髓形态学流式细胞术微小残留病灶检测（请在申请单上注明亚型，最好附初诊免疫分型报告；CMPD除外）查染色体核型分析或进行特异性FISH检测查特异性融合基因/基因突变定量、WT1基因定量等此外，还应进行耐药相关检测血液肿瘤治疗后残留检测建议流式细胞术检测微小残留病灶依据为是否违背细胞正常分化模式：表面抗原系列的变异；表面抗原表达不同步；表面抗原表达的缺失；表面抗原强度的异常。

37MRD主要检测方法比较方法覆盖范围敏感度备注实时定量PCR30-40%10-5-10-6只能针对特定的融合基因或基因突变流式细胞术微小残留检测大于90%10-3-10-4不适用于CMPDFISH30%10-3需要特定的染色体或基因异常，且有相应探针染色体核型分析50%10-2需要培养细胞到分裂中期报告时间较长

38行业现状集团发展Mayo的投资、技术转化合作前景前景与展望

39谢谢！欢迎批评指正！