生化实验二--果蔬中总糖及还原糖含量的测定

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生物化学实验第一部分果蔬成分的生化分析

1综合实验一：果蔬成分的生化分析实验一果蔬中维生素C的定量测定（4学时）实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）实验三果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）实验四果蔬中过氧化物酶分析（12学时）

2实验材料：冬枣＋柚子——1～4组梨（2个品种）——5～8组盘菜＋萝卜——9～12组

3实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定

4一、目的掌握总糖和还原糖含量的测定方法。学习分光光度计的原理和操作方法。

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6多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。

7三、实验器材1、植物材料2、吸管（1.0mL×2、5.0mL×2、0.1mL×2、0.2mL×2、0.5mL×2）3、试管（1.5cm×15cm×7）4、分光光度计5、水浴锅、电炉6、电子分析天平7、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗8、量筒、研钵、三角烧瓶

8四、实验试剂1、蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几滴甲苯作防腐剂）。3、6mol/LHCl溶液4、20%NaOH溶液：称取20gNaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100mL。

9五、操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取洁净试管6支，按下表进行操作：012345标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中5min蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸10′，冷却后室温放置10′，在620nm处比色A620nm步骤管号

10以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。

112、样品中还原糖的提取和测定称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温约0.5h（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100mL。过滤后冰箱保存。冬枣、柚子、梨：取滤液1mL→100mL盘菜、萝卜：取滤液10mL→100mL

12吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。

133、样品中总糖的提取、水解和测定称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性。然后用蒸馏水定容至100mL，过滤后冰箱保存。

14冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏水定容至100mL。盘菜、萝卜：取滤液10mL用蒸馏水定容至100mL。取总糖水解液1mL同上法进行还原糖测定。

15六、计算按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）。W（还原糖）＝×100%C1V1mW（总糖）＝×0.9①×100%C2V2m①乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。

16式中：W（还原糖）：还原糖质量分数（%）W（总糖）：总糖质量分数（%）C1：还原糖的质量浓度（mg/mL）C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL）V1：样品中还原糖提取液的体积（mL）V2：样品中总糖提取液的体积（mL）m：样品质量

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