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时间：2022-10-18
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微生物基本检验技术华中科技大学同济医院检验科
1致病菌的检验程序直接涂片镜检↑涂片镜检标本→分离培养→可疑菌落→生化反应↑血清学鉴定分子生物学技术药敏试验动物试验
2细菌形态学检查1、不染色标本检查2、染色标本检查
3显微镜普通光学显微镜暗视野显微镜相差显微镜荧光显微镜电子显微镜
4普通光学显微镜最为常用的一种显微镜，普通显微镜用油镜可放大1000倍，可将0.25μm的微粒放大到肉眼可见的0.25mm,一般细菌大于0.25μm，故用普通光学显微镜可见。
5暗视野显微镜多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。
6相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及内部结构。
7荧光显微镜
8扫描电子显微镜放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨1nm的物体，可观察细菌表面和内部超微结构。
9不染色标本检查应用：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查
10不染色标本检查-压滴法载玻片细菌悬液盖玻片
11不染色标本检查-动力观察动力+：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移动力-：受水分子撞击细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。
12染色标本的检查-常用染料碱性染料电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。细菌的等电点在pI2~5之间，易与带正电荷的染料结合而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。酸性染料:电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、刚果红等。复合染料（中性染料）及荧光染料复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。脂溶性染料如Sudanblack。
13染色标本的检查染色方法的种类单染法:采用一种染料染色复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。
14步骤：结果:阳性菌——紫色阴性菌——红色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立。革兰染色法（GramStain）
15Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.Figure2-GramstainofGram-E.colicellsFigure
16步骤：涂片固定酸性复红初染3%盐酸酒精脱色美蓝复染镜检抗酸染色法结果:抗酸菌———红色；非抗酸菌——蓝色。
17步骤：涂片固定金胺O染色盐酸酒精脱色复染镜检荧光染色结果:抗酸菌—明亮橘黄色；非抗酸菌-无荧光
18特殊染色荚膜染色
19特殊染色负染色（墨汁染色）
20特殊染色
21小结1、细菌形态学检查方法：不染色标本检查；染色标本检查2、常用染色方法：1）革兰染色2）抗酸染色3）荧光染色
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