gb 13091-1991 饲料中沙门氏菌的检验方法

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1、中华人民共和国国家标准饲料中沙门氏菌的检验方法GB13091一91MethodfordeterminationofSalmonellainfeeds本标准等效采用国际标准ISO6579-1981《饲料中沙门氏菌检验方法》。1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中沙门氏菌的测定方法。本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和动物性单一饲料中沙门氏菌的检验。2引用标准GB4789.1食品卫生微生物学检验总则3原理根据沙门氏菌的生理特性，选择有利于沙门氏菌增殖而大多数细菌受到抑制生长的培养基，进行选择性增菌、选择

2、性平板分离，以求检出饲料中的沙门氏菌。4设备和材料4.1天平:感量1g，最大秤量1000g,4.2显微镜:1500X。4.3温箱:36士1"C.43士10C。4.4冰箱:普通冰箱。4.5均质器:800010000r/min,4.6广口三角瓶:500mL.4.7三角瓶:250mL.4.8水浴锅:45士10C,55士10C,77士1'C。4.9吸管:1,5,10mL,4.10平皿:皿底直径9Cm,4.11电炉。4.12酒精灯。4.13接种棒:镍铭丝。4.14试管。4.15载玻片。4.16试管架。4.17干

3、燥箱:50^-250士1'C。4.18乳钵。国家技术监督局1991-07-16批准1992一04一01实施GB13091一914.19M度计，loono4.20高压灭菌器:2.5kg5培养墓和试荆详见附录A(补充件)。5.1缓冲蛋白陈水。5，2四硫磺酸钠煌绿增菌液。5.3亚硒酸盐肌氨酸增菌液。5.4酚红煌绿琼脂。5.5DHL琼脂，5.6营养琼脂。5，7三糖铁琼脂。5.8尿素琼A65.9赖氨酸脱狡试验培养基。5.10v-P反应培养基。5.11肌酸溶液。5.12--禁酚乙醉溶液。5.13氢氧化钾溶液。5.

4、14靛基质反应培养基。5.15柯凡克试剂。5-16P一半乳糖昔酶试剂。5.17半固体营养琼脂。5.18盐水溶液。6样品采集参照GB4789.1的要求执行。7检验程序沙门氏菌检验程序如下:Gs13091一91检验样品25g顶增菌培养荃〔缓冲蛋白陈水)225.L.在36-CC培养16-20h取预场曲培养物lOmL接种于四硫砚吐钠煌姆增圈液中，取预增曲培养物IO.L接种于亚硒酸盐跳氮酸增自液中，在43'C培养18-20h在36i1C培养18一24h或48h煌绿林脂(平皿)3631Y'培弃20-40h,DHL

5、凉脂(平皿)3631C培养20-24h,如有需要培养至相h如有书要，培养至48h每乎皿取5个有沙门氏留特征的自落，接种在营养旅脂上，3621℃培养18一24h生化鉴定血清鉴定结果报告8操作8.1预增菌培养取检验样品25g，加入装有225mL缓冲蛋白陈水的500mL广口瓶内(粒状可用均质器，以8000^-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎)。在36士1℃培养16^-20h,82选择性增菌培养取预增菌培养物10mL，接种于装有100mL四硫磺酸钠煌绿增菌液的培养瓶中，另取预增菌培养物1

6、0mL，接种于装有100mL亚硒酸盐胧氨酸增菌液培养瓶中，四硫磺酸钠培养瓶在43℃培养。亚硒酸盐胧氨酸培养瓶在36士1℃培养。8.3分离培养取8.2培养物一接种环，分别划线接种在酚红煌绿琼脂平皿和DEl琼脂平皿上，为取得明显的单个菌落，取一环培养物，接种两个平皿，第一个平皿接种后，不烧接种环，连续在第二个平皿上划线接种，将平皿底部向上在36士1℃培养。必要时可取8.2培养物重复培养一次。8.3门培养20^-24h后，检查平皿中是否出现沙门氏菌典型菌落，生长在酚红煌绿琼脂上的沙门氏菌典型菌落，使培养基颜

7、色由粉红变红，菌落为红色透明;生长在DHL培养基上的沙门氏菌典型菌落，为黄褐色透明，中心为黑色，或为黄褐色透明的小型菌落。8.3.2如生长微弱，或无典型沙门氏菌落出现时，可在36士I'C重新培养18.24h。再检验平皿是否有160GB13091一91典型沙门氏菌菌落。8.3.3辨认沙门氏菌菌落，在很大程度上依靠经验，它们外表各有不同，不仅是种与种之间，每批培养基之间也有不同，此时，可用沙门氏菌多价因子血清，先与菌落作凝集反应，以帮助辨别可疑菌落。8，4鉴定培养从每种分离平皿培养基上，挑取5个被认为可疑

8、菌落，如一个平皿上典型或可疑菌落少于5个时，可将全部典型或可疑菌落供进行鉴定。挑选的菌落在营养琼脂平皿上划线培养，在36士1℃培养18^24h，用纯培养物作生化和血清鉴定。8.4.1生化鉴定将从8.4培养基上挑选的典型菌落，接种在8.4.1.1^8.4.1.6培养基上。8.4门.1三糖铁培养基在琼脂斜面上划线和穿刺，在36士1℃培养24h。培养基变化见表1.表1三糖铁培养基变化表培养基部位}培养基变化黄色乳糖和蔗糖阳性琼脂斜面红色或不变色乳糖和蔗糖阴性底