微生物检验菌种保存与管理

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1、第十六章　菌种保存与管理本章考点：　　1.菌种保存方法　　2.菌种保管菌种保管简述、注意事项　　　　一、保存菌种的方法　　保存方法适用对象保存条件和时间培养基保存法（最常用而又简易的保存方法）普通琼脂斜面保存法一般细菌4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次血液琼脂斜面保存法链球菌、肺炎链球菌4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次巧克力色斜面保存法脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。鸡蛋斜面保存法含

2、有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌一般4℃冰箱中可保存一个月。半固体穿刺保存法大多数普通细菌4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月干燥保存法一般细菌干燥后低温保存，可保存数年至十几年冷冻干燥保存法（目前最有效的菌种保存方法之一）一般细菌冷冻真空干燥，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上液氮超低温保存法（目前保存菌种最理想的方法）一般细菌其他方法难以保存　　　　二、菌种保管　　1.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基。一般原则是使细菌能够生长而不易变异的前提下，必须选择营养丰富的培养基，一般不

3、用含糖的培养基。液体培养基不适于保存菌种。　　2.培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存。　　但应注意，一般细菌大多保存于4℃冰箱中，但真菌，霍乱弧菌、铜绿假单胞菌及粪产碱杆菌需在室温保存。而脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及初次分离的流感嗜血杆菌需保存于37℃孵箱中。　　3.保存菌种应做鉴定记录。在主要培养基上生长情况、菌落特征、形态及革兰染色或特殊染色反应、生化反应、血清学性状以及个别菌种需要的动物试验结果等。　　4.保存的菌种应有两套，一套供保存传代用，一套供实验用。　　5.定期转种，每转种三代作一次鉴定。　　6.专

4、人保管和发放，严格保管和发放制度。　　本章练习题：　　目前最有效的菌种保存方法是　　A.巧克力斜面保存法　　B.鸡蛋斜面保存法　　C.半固体穿刺保存法　　D.干燥保存法　　E.冷冻真空干燥法　　[答疑编号1]　　『正确答案』E　　将细菌接种于琼脂半固体培养基内，置4℃冰箱保存。保存时间可达几个月　　A.1～3个月　　B.2～4个月　　C.3～6个月　　D.1个月　　E.3个月　　[答疑编号2]　　『正确答案』C　　关于菌种保管正确的是　　A.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基　　B.培养后最好在细菌

5、尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存　　C.保存菌种应做鉴定记录　　D.定期转种，每转种三代作一次鉴定　　E.专人保管和发放，严格保管和发放制度　　[答疑编号3]　　『正确答案』ABCDE第十七章　细菌检验的商品化、自动化设备本章考点：　　（1）微量生化反应系统　　（2）自动化装置　　第一节　微量生化反应系统　　　　一、常用的微量生化反应系统　　根据细菌的不同生物学性状及其代谢产物的差异，可采用多种生化反应系统鉴定细菌，现已有商品化的成套产品，它多由10～24项生化指标组合而成，通过对结果的判定，得出一个3～7位的数据，查阅编码

6、手册即可获得相应的细菌名称。常用的微量生化反应系统有以下几种：　　（一）Micro-ID系统　　本系统主要用于肠杆菌科的细菌鉴定。它是一块带有15个反应池的塑料板，每个反应池含有一种生化反应培养基及试剂。　　（二）API系统（目前较常用的微量生化鉴定系统）　　API系统为一块塑料板，上有20个小杯，每个小杯装有不同的生化反应培养基和指示剂。API系统鉴定范围API-20E肠杆菌科细菌API-20NE非肠杆菌科细菌APIStaph葡萄球菌属和微球菌属细菌APIStrep链球菌属细菌APICoryne棒状杆菌属细菌API50CHB

7、芽胞杆菌属等革兰阳性杆菌APINH奈瑟菌属、布兰汉菌属和嗜血杆菌属细菌APICanpy弯曲菌和螺杆菌API-20A厌氧菌　　（三）Minitek系统　　该系统为带有l2个凹孔的塑料盘。包括34种生化反应培养基及指示剂的滤纸片。　　（四）肠杆菌-MBl2E系统　　该系统为一块96个凹孔的塑料板，分8排。可同时鉴定8份标本。每孔含有一种干燥生化培养基，可提供12项生化反应。　　（五）氧化发酵鉴定系统　　该系统主要有氧化发酵管可应用于非发酵菌，也可用于气单胞菌等一部分发酵型细菌的鉴定。　　　　二、自动化装置　　（一）半自动微生物鉴定

8、和药敏系统　　1.VITEK—ATB（Automicrobic系统）　　（1）原理：将肉眼观察的结果输入电脑，结果与数据库内的细菌条目比较，自动得到鉴定结果。ATB敏感试验采用半固体培养基，不同的药敏试条含有不同种类抗生素。在24小时内通过观察有无细菌生长以判断药敏试验结果。