微生物检验微生物学检验概述

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1、第九章　微生物学检验概述本章考点：　　1.临床微生物学检验的目的与要求　　2.标本采集与运送　　3.微生物学检查　　4.血清学诊断　　5.临床微生物实验室安全措施和质量保证　　6.动物试验　　7.免疫检测技术　　8.发光分析技术　　9.鲎试验　　10.分子生物学在病原微生物中的应用　　临床微生物工作的第一步就是要正确、规范地采集和运送标本，然后根据微生物学检验的特点和临床要求进行初步诊断和确定诊断。（结合临床作出病原学诊断）　　临床细菌实验室的主要工作是从临床标本中分离出病原菌并进行准确鉴定，同时指导临床合理应用药物，为临床诊断、治疗、预后和流行病学调查以及医院内感染的监控

2、提供可靠的依据。　　一、临床微生物学检验的目的和要求　　（一）临床微生物学检验的目的　　1.为临床感染性疾病的诊断提供病原学依据。　　2.为临床感染性疾病的治疗提供参考用药的信息。　　3.为医院感染提供病原微生物及其耐药性动态信息。　　4.改进或更新临床微生物学检验的方法。　　（二）临床微生物学检验的要求　　1.快速、准确地提出检验报告。　　2.检验人员必须有较丰富的微生物学基础知识和熟练、正确的操作技能，必须养成有菌观点和无菌操作的习惯。　　3.临床微生物学检验必须进行全面质量控制，并参加和接受质量控制考核。　　4.重视实验室消毒灭菌工作。　　（三）诊断试验的选择原则　　

3、1.选择有鉴定价值的试验：要对两种细菌进行鉴定，须选择一项两种菌呈现绝然不同结果的试验，即一种菌呈现阳性（阳性反应的菌株阳性率须大于90％），另一种菌为阴性（阴性反应的菌株阳性率应小于10％），这项试验才有鉴定价值。否则，就没有鉴定价值。　　2.选择简易、快速、方便的试验：①鉴定一种细菌可能有多种特异的方法，没有必要逐一进行试验，只选择其中一或两种达到目的即可，多选无意义。②选择操作简便、快速的方法。③选用复合培养基，一次操作可同时看几个生化反应，如克氏双糖铁（KIA），动力靛基质脲酶（MIU）等。　　3.综合考虑试验的敏感性和特异性：试验敏感性越高，假阴性结果就越少。特异

4、性越高，假阳性结果越少。试验的敏感性和特异性是相互联系的，试验的敏感性增加，会使特异性下降，反之亦然。　　二、标本的采集和运送　　标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此在标本采集、送检、保存等各个环节都要规范操作，严格控制，是确保实验结果准确可靠的前提。　　（一）标本采集的一般原则　　1.早期采集：采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。　　2.无菌采集：采集的标本应无外源性污染。　　在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作；

5、　　对于与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取活组织检查，而不应从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊；　　对于从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本，应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基。　　采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。　　3.根据目的菌的特性用不同的方法采集：厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌，以及L型菌采用的方法不同。　　4.采集适量标本：采集量不应过少，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。　　5.安全

6、采集：采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全，防止传播和自身感染。　　（二）标本的处理　　一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检，而其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中。脑脊液、滑膜液等则要在25℃保存。一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。　　厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器送。　　三、微生物学检查　　临床微生物学实验室接到标本后应立即进

7、行微生物学检验。主要包括直接镜检、检测特异性抗原或病原体成分、进行分离培养和鉴定、体外药敏试验等，各种检查方法的比较见表5-9-1。表5-9-1　微生物学检查方法、判断和速度方　法鉴定类型速　度直接镜检初步诊断5～10min免疫荧光（直接法）快速诊断1～2h乳胶凝集快速诊断15～30min对流免疫电泳快速诊断2h气-液相色谱鉴定1.5～2hDNA探针快速诊断、鉴定1～3天PCR快速诊断数小时微量鉴定系统鉴定3～6h常规法确定诊断数天或以上　　（一）直接镜检　　1.初步诊断；　　2.指导进一步检出步骤和鉴定方法的选择