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《GBT26350-2010蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ICs11.020CO5中华人民共和国国家标准GB/T26350-2010蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法Test1nethodsoFFIyresistaⅡcetoinsecticidesˉˉThebioassaymethodsFormuscadomestica2011-01-14犭之刁亩⒛11-05-01实施中华人民共和国卫生部发布中国国家标准化管理委员会G口/T26350-2010前言本标准按照GB/T1.1—zO09给出的规则起草。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国农业大学、北京市疾病
2、预防控制中心、中国人民解放军军事医学科学院傲生物流行病研究所。本标准主要起草人:高希武、曾晓亢、马彦、刘婷、梁沛、钱坤、赵彤盲。标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB/T26350-2010蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法1范围本标准规定了家蝇(虫菊酯等杀虫药剂抗药性的生物检测方法。本标准适用于家蝇验室生物检测。2术语和定义⑸下列术语和2.1诊断剂Ⅰ由敏感品量值,该剂量值能使敏感品系99个体。2.2www.bzfxw.comF1代F1从现场捕2.3点滴法将一定量的2.4药膜法将一定量的药液的表面并形成均匀的
3、药膜,然后载体上,药剂通过昆虫的足、体壁等进人虫体内起间隔一定时间后统计死亡载体有滤纸、玻璃表面等。3试虫现场采集家蝇,室内饲养,羽化后3d~5d的F1代雎性家蝇。4试剂丙酮或其他有机溶剂、C02或乙醚、杀虫药剂原药。5仪器具可控光照和温度的培养箱或房间,养虫笼,100mL血清瓶,移液管,微量点滴器(微量进样器)。1GB/T26350-20106测试条件温度:25℃±1℃,光周期:14L:10D,相对湿度:60%~gO%。7敏感基线法7.1原理依据杀虫剂应用剂量和害虫死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀
4、虫剂毒力回归线作为为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水平。具体是比较两条毒力回归线的3值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。7.2操作步骤7.2.1药膜法(通过预实验确定药剂的浓用丙酮或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度80%),然后取0.5mL溶液加人100mL血度系列范围,最低浓度时死亡率小于zO%,最高浓度时大于清瓶中,不断转动血清瓶,使药液均匀分布于瓶内壁,置于通风橱中过夜,使有机溶剂挥发完全。然后每瓶放试虫20只,用纱网或纱布封
5、口。实验重复5次。以相应溶剂处理为对照组。3h后统计死亡率。LC50值。需要分别测定并求出实验根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程,根据回归方程可以求出室敏感种群和待测种群www.bzfxw.com的LC5°值。7.2.2点滴法(通过预实验确定药剂的浓用丙酮或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度乙醚或C02等麻醉至昏度系列范围,最低浓度时死亡率小于zO%,最高浓度时大于80%),将试虫用迷。用微量点滴器将0.5uL~1uL杀虫药剂溶液点滴在雌性家蝇前胸背板上。每个处理点滴30只羽3次。将受药后的试虫转
6、人清洁容器化后3d~5d雎性家蝇,以相应溶剂点滴为空白对照,实验重复内,供给水和食物,正常饲养,24h后统计死亡率。根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程,根据回归方程可以求出LD5°值。需要分别测定并求出实验室敏感种群和待测种群的LD50值。7.3死亡判断试虫完全不动或腹部上翻、抽搐,不能爬行视为死亡。7.4结果表述结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC5°(LD50)值/敏感种群LC5°(LD50)值。7.5判别标准敏感品系和测定样本95%置信限不重叠,且抗性倍数≥5倍为抗性种群。8诊断剂Ι法8.1原理依据药剂
7、对敏感品系的毒力回归线,确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。2标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB/T26350-ˉ2010一般用敏感品系的LD99(LC99)值作为诊断剂量,预期死亡率为99%。8.2操作步骤8.2.1药膜法用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂稀释到一定的浓度,取0.5mL溶液加人100mL血清瓶中(血清瓶内表面药膜的最终剂量达到诊断剂量,常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量参见表A。D,不断转动血清瓶,使药液均
8、匀分布于瓶内壁,置于通风橱中过夜,使有机溶剂挥发完全。然后每瓶放试虫20只,用纱网或纱布封口。实验重复5次。以相应溶剂处理为对照组。在测试条件下放置3h后,检查结果并计算死亡率。8.2.2点滴法用丙酮或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到诊断剂量需要的浓度。将试虫用乙醚、C02等麻醉至昏迷。用微量点滴器将0.5uL~1uL杀虫药剂溶液点滴在
