DB46∕T 536-2021 西番莲(百香果)种苗病毒检测技术规程(海南省)

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1、TCS65.020.20CCSB210046ET山巳海南省圃，万标准DB46/T536-2021西番莲(百香果)种苗病毒检测技术规程Technicalregulationsofdetectionforvirusinpassionfruitseedling2021-08-02发布2021-09-01实施海南省市场监督管理局发布DB46/T536--2021目IJ1=1本文件按照GB/T1.1--2020<<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由海南省农业农村厅提出并归口。本文

2、件起草单位:中国热带农业科学院热带生物技术研究所、农业农村部热带作物种子种茵质量监督检验测试中心。本文件主要起草人:王健华、应东山、尹慧样、余乃迪、刘志、昕、王军、王辉。DB46/T536--2021-->-号E司西番莲(百香果)容易被多种植物病毒侵染，以马铃薯Y病毒属CPotyvirus)为主，该属侵染西番莲的常见病毒有东亚西番莲病毒CEastAsia刀passifloravirus,EAPV)、西番莲斑驳病毒CPassiωfruitmottlevirus,Pa盯)、西番莲木质化病毒CPassionfrllitwoodinessvirlls,PWV)、夜来香花叶病毒CTelo:3m

3、amosaicvirlls,TeMV)等。为提高检测效率，简化检测流程，本文件不针对单个种进行逐一检测，而拟采用属的通用检测方法，以马铃薯Y病毒属CPotyvirlls)为检测对象，同时检出该属内的多种病毒，以期满足西番莲种面生产和调运过程中的病毒检测基本需求。IIDB46/T536--2021西番莲(百香果)种苗病毒检测技术规程1范围本文件规定了西番莲(Passiflorasp.)种苗病毒检测的术语和定义、检测对象、抽样方法、检测方法、质量要求和处理办法。本文件适用于西番莲种苗生产及调运过程中的病毒检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性寻用而构成本文件必不可少的条款

4、。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不住日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY!T401--2000脱毒马铃薯种薯(茵)病毒检测技术规程NY!T3179--2018甘庶脱毒种苗检测技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1原种elit用来繁育采穗母株、且未检出本文件规定的检测对象的西番莲种苗。3.2采穗母株spikeplcki吨)Iant用原种作种苗，在防虫网室、温主导严格隔离条件下保存或扩繁，专门为生产西番莲种苗提供嫁接接穗和杆插枝条的西番莲植株。3.3带毒率virus-carryingrate西番莲种苗中受病毒侵染的植株

5、的比率。3.4病毒病显症率virus-symptomrate西番莲种苗中出现病毒病症状的植株的比率。4检测对象马铃薯Y病毒属CPotyvirus)。DB46/T536--20215抽样方法5.1原种每株必检，每3个月进行病毒检测1次。5.2采穗母株采穗圃每半年检测1次，每株一年内至少被抽检1次。5.3商品苗同一批生产批次或同一调运批次的种茵为同一检验批。采用随机抽样方法，按同一检验批不小于o.5%的比例抽样，最低抽样数量为20株。6检测方法6.1试纸条检测法6.1.1适用情形种苗生产和调运过程中需要在现场快速获知病毒检测结果的情形。6.1.2采样方法及样品保存每株取淡绿期展开叶片1张

6、，单独放到封口塑料采样袋里，挤掉袋内空气，密封后妥善保存。样品在2oC~8oC条件下保存，保存期不应超过3d;若需长期保存，需放置80oC冰箱，且避免反复冻融。6.1.3操作方法用马铃薯Y病毒属的通用检测试纸条进行现场快速检测。具体操作方法技产品说明执行。6.1.4结果判定试纸条远液端控制统位置出现反应条带时，检测结果万可信。试纸条插入反应液中20min左右检测线位置出现反应条带的，样品判定为Fotyvirus阳性，未出现反应条带的，判定为阴性。6.2酶联免疫吸附测定(ELISA)卜6.2.1适用情形样品数量较多(一般40份以上)，宜用ELISA检测法。适用于:全测采穗母株。6.2.

7、2采样方法及样品保存按照6.1.2给出的要求执行。6.2.3操作方法用马铃薯Y病毒属的通用抗血洁进行ELISA检测。用已知含马铃薯Y病毒属的西番莲样品做阳性对照，用已知不含马铃薯Y病毒属的西番莲样品做阴性对照，用无菌水替代样品做空白对照。操作方法按NY/T401--2000的附录A规定执行。6.2.4结果要IJ定2DB46/T536--2021阳性对照、阴性对照和空白对照的检测结果均与预期相符时，检测结果方可信。被检样品与阴性对照之间的OD40o值比值二三