《食品微生物学》实验指导书

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1、《食品微生物学》课程课程编号：419005实验指导书主撰人曾智审核人陈跃进单位：生命科学系二O一二年六月目录前言1实验一、显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察3实验二、细菌的革兰氏染色6实验三、微生物细胞大小测定和浓度测定8实验四、培养基的制备与灭菌12实验五、环境中微生物的检测17实验六、水中细菌总数检测20前言1．实验总体目标微生物学实验课是一门操作技能较强的课程。通过本课程的学习，要求学生牢固地建立无菌概念，掌握微生物实验的一套基本操作技术；树立严谨、求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力；树立勤俭节约、爱护公物、相互协作的

2、优良作风。⒉适用专业年级生物技术专业二年级第一学期⒊实验课时分配24实验项目实验要求实验类型每组人数实验学时实验一显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察必验证24实验二细菌的革兰氏染色必验证24实验三微生物细胞大小测定和浓度测定必综合24实验四培养基的制备与灭菌必综合24实验五环境中微生物的检测必验证24实验六水中细菌总数检测必综合244.实验环境在微生物学及发酵工程分室中进行，要求至少提供8套可用的仪器设备，分析天平1台，离心机1台，分光光度计1台，恒温水浴3台，高压蒸汽灭菌锅2台，超净工作台3台，恒温摇床2台，恒温培养箱2台，干燥箱1台，冰

3、箱1台。实验室面积60M2以上，通风、照明设施良好，消防设备齐全，疏散通道正常。5.实验总体要求通过本实验课程的教学，学生能基本上达到独立完成实验内容，通过老师的指导可完成研究性实验内容，能将微生物菌种分离与鉴定、无菌操作等相关知识应用到课程设计、创新性研究、毕业论文等实践性环节中。6.本课程的重点、难点及教学方法建议（1）重点：无菌操作、微生物分离与鉴定等。（2）难点：严格按照微生物实验操作要求进行各项实验，并理解各注意事项的原因。（3）教学方法建议：注意理论与实际相结合，重视动手能力的培养和锻炼，对22实验结果的可靠性进行对照分析和检测分析

4、。对理论性较强、较为抽象的问题、原理着重讲解，如革兰氏染色法的原理和应用。22实验一显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察一、实验目的掌握显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。二、实验主要设备及材料微生物标本装片，香柏油，二甲苯，光学显微镜，擦镜纸。三、实验原理、方法和手段油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更

5、加清晰。当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n=1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的油镜时，能辨别两点之间的距离则为0.22μm。        光学显微镜

6、的成像原理（倒立的虚像）介质为空气与介质为香柏油时光线通过的比较四、实验内容与步骤（一）观察前的准备221、将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约4cm。坐正后用左眼观察。2、调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。（二）低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜

7、正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。（三）高倍镜观察眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。不要移动装片位置，准备用油镜观察。（四）油镜观察1、提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位（镜头的正下方）滴一滴香柏油。2

8、、从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。3、将光线调亮，左眼从目镜