病毒和朊病毒

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1、病毒和朊病毒生物学导论I：分子、细胞与生物的发育一、病毒的发现和研究历史1886年，A.Mayer发现具有传染性的烟草花叶病；1892年，D.Ivanovsky:烟草花叶病病原体能通过细菌滤器：一种能通过细菌滤器的”细菌毒素”或极小的细菌1898年，MWBeijerinck对烟草花叶病病原体的研究结果：能通过细菌滤器；可被乙醇沉淀而不失去其感染性，能在琼脂凝胶中扩散；用培养细菌的方法不能被培养出来，推测只能在植物活细胞中生活；比细菌小的具有传染性的活的流质（contagiumvivumfluidum）1900年前后，包括口蹄疫（footandmouth

2、disease）在内的多种动植物疾病病原体的滤过性特性被证明。filterableviruses（滤过性病毒）viruses（病毒）1935年，WMStanley首次提纯并结晶了烟草花叶病毒；Bawden等证明烟草花叶病毒的本质为核蛋白；1940年，Kausche首先用电镜观察到烟草花叶病毒颗粒；禽流感病毒正在侵染细胞（2007年）病毒学（Virology）：研究病毒（virus）的本质及其与宿主的相互作用的科学。例如一些简单的病毒仅由核酸和蛋白质外壳（coat）构成，故可把它们视为核蛋白分子。二、病毒的特点和定义特点1）不具有细胞结构，具有一般化学大

3、分子的特征。2）一种病毒的毒粒内只含有一种核酸，DNA或者RNA。3）没有催化能量代谢的酶或酶系极不完全，不能进行独立的代谢作用。4）严格的活细胞内寄生，必须依赖宿主细胞进行自身的核酸复制，形成子代。5）个体微小，在电子显微镜下才能看见。6）对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。单细胞微生物与病毒性质的比较aDNA病毒和RNA病毒中的一部分;b利福平可抑制痘病毒复制病毒的个体特点形体极其微小，必须在电子显微镜下才能观察，一般都可通过细菌滤器；无细胞构造；主要成分仅为核酸和蛋白质；每一种病毒只含一种核酸，DNA或RNA；无产能酶系，也无蛋白质合成系统；不

4、存在个体的生长；细胞内专性寄生；在离体条件下，以无生命的大分子存在。病毒的定义迄今仍无一个科学而严谨的定义病毒为具有独立于其宿主进化史的绝对细胞内寄生物，它的DNA或RNA基因组被其所编码的蛋白质壳体化（encapsidation）。-------------（Fields等，1990年）非细胞生物（真）病毒：至少含核酸和蛋白质二种组分亚病毒类病毒：只含具侵染性的RNA组分卫星RNA：只含有不具侵染性的RNA组分朊病毒（普列昂）：只含蛋白质三、病毒的宿主范围及其多样性病毒几乎可以感染所有的细胞生物，并具有宿主特异性噬菌体（phage）植物病毒（plan

5、tviruses）动物病毒（animalviruses）-形态：最小：细小病毒（20nm）最大：痘病毒（300nm）最长：线状病毒（800-900nm,最长：14000nm）核酸类型：DNA/RNA；单链/双链/部分单链；线状/环状。病毒的多样性四、病毒的培养和纯化1、病毒的培养噬菌体细菌培养物培养液营养琼脂平板细菌培养液变清亮细菌平板成为残迹平板二元培养物法噬菌体经过适当稀释再接种细菌平板，培养后在菌苔上可形成圆形局部透明区域，即噬菌斑(plague)如同对细菌计数一样，形成的噬菌斑也可用于对噬菌体的数目进行估算。动物病毒的培养：1、实验动物2、鸡胚

6、3、多种细胞培养免疫缺陷动物(SCID小鼠）对病毒感染无免疫排斥可接入人的免疫细胞等，使之具有人的免疫功能，用于研究HIV、疱疹病毒等与免疫系统的相互关系SCID：severecombinedimmunodeficient鸡胚的构造和病毒培养羊膜腔尿囊腔卵黄囊尿囊绒膜单纯疱疹病毒痘病毒劳氏肉瘤病毒流感病毒腮腺炎病毒单纯疱疹病毒流感病毒腮腺炎病毒新城疫病毒鸟类腺病毒1、病毒的培养若标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域，即蚀斑（plaque）或称空斑。大多数动物病毒感染敏感细胞培养层能引起其显微表现的改

7、变，即致细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE），例如细胞聚集成团、肿大、圆缩、脱落，细胞融合形成多核细胞，细胞内出现包涵体（inclusionbody），乃至细胞裂解等。细胞培养层植物病毒的培养植物病毒敏感植物叶片产生坏死斑，或称枯斑蛋白质提纯方法（盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、凝胶层析、离子交换等）2、病毒纯化标准纯化的病毒应保持感染性病毒是有感染性的生物体病毒具有化学大分子的属性纯化的病毒应具有理化性质均一性方法主要化学组成为蛋白质具有一定的大小、形状和密度差速离心梯度离心（超速离心）四、毒粒的性质毒粒（病毒颗粒）：病毒的细胞

8、外颗粒形式，也是病毒的感染性形式。一团能够自主复制的遗传物质蛋白质外壳包膜1、毒粒的形态病毒的