1、细胞生长状况有关指标的检测方法 一、细胞计数 这是细胞培养中常用的基本技术之一。所用材料为细胞计数板。巴氏吸管和显微镜。步骤如下。 l 取清洁计数板和专用盖玻片，用丝绸布轻轻擦干。 l 取细胞悬液0.3ml，加入0.9结晶紫染液，混匀后滴半滴于细胞计数板内，以充满不外溢为宜。也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中，不要溢出，也不要过少或出现气泡。 l 在显微镜下用10X物镜观察计数四角大方格中的细胞数。代入下式得出细胞密度。细胞数（ml）=（4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数 台盼蓝染色法可计算出活细胞和死
4、伏期，再进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后衰老。 细胞生长倍数是指测定接种时活细胞的浓度，经1个生长周期达到最大活细胞浓度比例。生长倍数=培养后最大活细胞数浓度/接种时的活细胞浓度 三、细胞分裂指数 细胞分裂指数是表示细胞增殖旺盛程度的指标。它以被测的1000个细胞中的分裂细胞数来计算。其方法为：用秋水仙素将细胞处理1-2h后，玩染色制片法制片并染色，计算1000个细胞中分裂象的数目，重复4次取平均值，用百分比表示。 l 细胞准备。用支持物盖片培养法。 l 每24h取出一个小盖片，按常规方法进行固定，吉姆萨染色或
5、HE染色，封片，制成永久标本。 l 显微镜下选择细胞密度适中的区域观察分裂细胞并计数。逐个视野进行，对每一时间组的盖片各取细胞多、中、少的区域各一个，共计算1000个细胞，计算出平均分裂细胞所占百分比。观察时要掌握好分裂象标准，主要是确定好划分间期和前期，末期和间期等的界限，以减少误差。 细胞分裂指数=分裂细胞数/细胞总数（1000）×1000[next] 四、细胞接种存活率 细胞接种存活率又称细胞贴壁率。它是下拨被制成分散的悬液后，以低浓度（2-5个/cm2）接种到底物上，贴壁并能存活生长形成细胞小群（克隆）的细胞百分数值，用
6、以表示细胞的生存能力和细胞群的活力。 l 取对数生长期细胞，用消化法制成细胞悬液，计数后按检测细胞生长曲线接种细胞的原则，将细胞接种于培养瓶中，接种12-15瓶。 l 每2h取出一瓶，倒掉培养科，然后加入胰酶消化已贴壁细胞，计数已贴壁细胞，用下面的公式逐个计算每个时间上的贴壁率。每2h一次，共观察24h即12次。接种存活率（贴壁率）=（贴壁村活细胞数/接种细胞数）X100% 五、克隆形成率 细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增值活力的细胞。克
7、隆形成率反映细胞群体依赖性和增值能力两个重要性状，由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率低，传代细胞系高；二倍体细胞克隆形成率低，转化细胞系高；正常细胞克隆形成率低，肿瘤细胞高。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在皿中，持续1周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。 1、平板克隆形成试验 l 取对数生长期的单层培养细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在含10%胎牛血清的RPMI培养基中备用。 l 将细胞悬
