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1、中华人民共和国国家标准GB5009.210—2016食品安全国家标准食品中泛酸的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB5009.210—2016前言本标准代替GB/T5009.210—2008《食品中泛酸的测定》。本标准与GB/T5009.210—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中泛酸的测定”;———增加了高效液相色谱方法;———修改了食品的前处理方法;———增加了检出限和定量限。ⅠGB5009.2
2、10—2016食品安全国家标准食品中泛酸的测定1范围本标准规定了食品中泛酸和泛酸钙的测定方法。本标准第一法适用于食品中泛酸的测定,第二法适用于营养素补充剂类保健食品和配方食品中泛酸(钙)的测定。第一法微生物法2原理泛酸是植物乳杆菌Lactobacillusplantarum(ATCC8014)生长所必需的营养素,在一定控制条件下,将植物乳杆菌液接种至含有试样液的培养液中,培养一定时间后测定透光率(或吸光度值),根据泛酸含量与透光率(或吸光度值)的标准曲线计算出试样中泛酸的含量。3试剂和材料除非另
3、有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1盐酸(HCl)。3.1.2冰乙酸(C2H4O2)。3.1.3氢氧化钠(NaOH)。3.1.4氯化钠(NaCl)。3.1.5碳酸钠(Na2CO3)。3.1.6碳酸氢钾(KHCO3)。3.1.7磷酸氢二钾(K2HPO4)。3.1.8三水合乙酸钠(C2H3O2Na·3H2O)。3.1.9三水合磷酸二氢钾(KH2PO4·3H2O)。3.1.10七水合硫酸镁(MgSO4·7H2O)。3.1.11七水合硫酸亚铁(FeSO
4、4·7H2O)。3.1.12一水合硫酸锰(MnSO4·H2O)。3.1.13三羟甲基氨基甲烷(C4H11NO3)。3.1.14葡萄糖(C6H12O6)。3.1.15甲苯(C7H8)。3.1.16无水乙醇(C2H6O)。3.1.17阴离子交换树脂Dowex1×8:粒度38μm~75μm。1GB5009.210—20163.1.18碱性磷酸酶:酶活力≥23U/g。3.1.19鸽子肝脏丙酮提取物干粉(liveracetonepowder,frompigeon):酶活力≥0.1U/g。3.1.20蛋白胨
5、:含氮量≥10%。3.1.21酵母提取物:含氮量≥10%。3.1.22琼脂。3.2试剂配制3.2.1乙酸溶液(0.2mol/L):吸取11.8mL冰乙酸,用水稀释至1000mL,混匀。3.2.2乙酸钠溶液(0.2mol/L):称取27.2g三水合乙酸钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。3.2.3盐酸溶液(1mol/L):吸取83mL盐酸,加水稀释至1000mL,混匀。3.2.4盐酸浸泡液:吸取100mL盐酸与50倍水混合。3.2.5氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠,加水溶解并
6、稀释至1000mL,混匀。3.2.6氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称取4g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。3.2.7Tris缓冲液:称取121.0g三羟甲基氨基甲烷溶于500mL水中,用冰乙酸调pH至8.1±0.1,加水至1000mL,混匀。贮存于2℃~4℃冰箱中,可保存2周。3.2.8生理盐水:称取9g氯化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。临用前预先灭菌,于121℃高压灭菌10min后备用。3.2.9乙醇溶液(20%):量取200mL无水乙醇与800mL水混匀。3.2.
7、10碳酸钠溶液(0.08mol/L):称取8.5g碳酸钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。3.2.11碳酸氢钾溶液(0.02mol/L):称取2g碳酸氢钾,加水溶解并稀释至1000mL。混匀。3.2.12碱性磷酸酶溶液:称取2g碱性磷酸酶,加水溶解并稀释至100mL。临用现配,2℃~4℃冰箱预冷。3.2.13鸽子肝脏提取液3.2.13.1活化Dowex1×8:称取100gDowex1×8于锥形瓶中,加入1L盐酸溶液,置于振荡器上充分振摇10min,用铺有滤纸的布氏漏斗过滤。Dowex1×8转
8、回锥形瓶,再加入1L盐酸溶液重复振摇、过滤。Dowex1×8加入1L水振摇10min,过滤,重复用水洗涤10次。逐滴加入Tris缓冲液调节Dowex1×8pH至8.0±0.1。2℃~4℃冰箱保存,2天内用完。3.2.13.2鸽子肝脏提取液:配制此试剂前一天将所用容器放入2℃~4℃冰箱中冷藏过夜。称取30g鸽子肝脏丙酮提取物干粉,放入研钵中,冰浴条件下分两次加入300mL碳酸氢钾溶液研磨至匀浆,转入具塞离心管中,盖好塞后充分振摇,-20℃冷冻10min后以3000r/min离心5min,将上清液转
