从蚊子血中检测人dna

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1、从蚊子血中检测人DNA　　【摘要】目的从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的DNA分型。方法Chelex100法提取叮咬人后的 　　蚊子血DNA，PowerPlex16试剂盒和Identifiler试剂盒扩增DNA。结果蚊子血中可成功检测出被叮咬人的DNA基因 　　型。结论可从蚊子血中检测到被叮咬人的DNA数据，结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测的 准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。 【关键词】蚊子；人；DNA分型 【中图分类号】19919．2；(175 【文献标识码】B 　　【文章编号】1007—9

2、297(XX)02—0138—02 　　实践中的法医DNA检验样品具有多样性、复杂性，且常为 　　微量、已部分降解的生物物证，例如蚊子血。本文对蚊子体内血 　　进行DNA检测，成功得到被叮咬者DNA数据，并进一步对DNA 　　分型结果的可靠性及如何提高检测结果的准确率进行研究。 材料和方法 一 、样本和试剂 (一)样本 　　叮咬人血后不久被拍死的蚊子1只。分别取血痕和混杂有 　　蚊子残片的部位，1名被叮咬志愿者新鲜静脉血作对照。 (二)试剂与仪器 　　抗人血红蛋白胶体金测试剂条(E—boatDallas公司)。 　　Pow

3、erPlex16Kit(Promega公司)。AmpFLSTRIdentifilerKit 　　(ABI公司)。9700型PcR仪(ABI公司)。ABI3100Gene6cAn— alyzer(ABI公司)。 二、方法 (一)DNA提取 　　样本于500l纯水中浸泡30min，抗人血红蛋白胶体金测 　　试剂条检验后，Chdex一100法提取DNA。 (二)PCR扩增及检测 　　PowerPlex16System复合扩增试剂盒、AmpFLSTRIdentifil— 　　erSystem复合扩增试剂盒分别扩增样本DNA，反应体

4、系为20"l 　　，ABI3100GeneticAnalyzer检测。 　　表1蚊子体内血扩增结果(PowerP~x16System) 　　*为一个基因座中，两个等位基因峰高比值99．99％。蚊子DNA不影响检测结果。 　　DNA分型结果的准确性很大程度取决于样品中模板DNA ·139· 　　的量和纯度。一般来讲，STR基因座中由于等位基因属小片段 　　<400bp，两个等位基因之间差异扩增不如小卫星VNTR显著， 　　等位基因峰高基本相同。但当模板DNA极微量、DNA降解或有 　　抑制剂存在时，可能导致某一个等位基因优先

5、扩增，一个基因座 　　的两个等位基因峰高会出现不平衡现象。由于现场提取的蚊子 　　血一般较微量，同时蚊子体内可产生某些酶类，易引起DNA降 　　解，从而影响DNA结果。本实验中，在用PowerPlex16试剂盒 　　检测时，蚊子血痕1在PentaE、CSF1P0、TPOX基因座上，出现 　　一个基因座中两个等位基因峰高比值<50％，D16S539基因座 　　上出现等位基因14丢失的现象，易导致错误判型。而Identifiler 　　试剂盒则无此类现象。因此我们认为对此类样品必须：1)重新 　　扩增；2)另选试剂盒扩增以确定

6、结果是否有可重复性，提高判型 　　的准确性。本实验联合应用identifiler试剂盒对样品PCR扩增、 　　电泳检测后，得到以上几个基因座的正确DNA分型结果，提高 了对微量、降解的样品DNA检测的可靠性。 　　本实验研究结果表明，通过对案件现场提取的蚊子血进行 　　DNA检测．可以得出人DNA分型结果。为避免模板量微、降解 　　引起DNA分型结果的误判，在实际应用时，应用两个以上试剂 　　盒进行扩增，对结果进行综合分析、判断，将大大提高检测的准 确率。 参考文献 　　[1]郑秀芬．法医DNA分析．XX：中国人民公安大学

7、出版社，2002．201 　　[2]伍新尧．高级法医学．郑州大学出版社，2002．251 　　(收稿：2003—09—02；修回：2003—11—23)