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《14-3-3ξ基因复制外显子转录后加选择性剪接互斥剪接硕士论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、果蝇14-3-3ξ基因选择性剪接机制的研究【摘要】真核生物基因在转录后需要经过一系列复杂的后加工过程才能够成为具有正常生物学功能的成熟mRNA,后加工过程包括加帽、加尾、RNA编辑和选择性剪接等。而前体mRNA的选择性剪接则显著增大了蛋白质的多样性,以及基因表达的复杂程度。真核生物的内含子有一个明显的特征,就是在很多物种中其5’和3’剪切位点的基本序列都具有相对很高的保守性,内含子从mRNA前体转录产物中的去除和随后外显子的连接称作mRNA前体的剪接,它是构成真核基因表达和基因调控水平的一个重要方面。选择性剪接在真核生物蛋白质组的扩展
2、以及新功能的产生中起着积极的作用,其多种剪接形式在功能调控水平上受到越来越多的重视,特别是通过改变生物大分子的局部结构导致的细微调控对重要功能产生的影响。14-3-3蛋白家族的成员形成了一组分子量为30kDa的高度保守的酸性蛋白,在许多器官和组织中广泛表达。14-3-3现已被证实是一个二聚体蛋白家族,能够调控蛋白质之间的相互作用。其作用涉及细胞信号通路,细胞周期进程的调控,胞内靶向作用,细胞骨架结构和转录等方面。二聚体结构的特定组成成分可能会影响与14-3-3相互作用的蛋白,这种相互作用的调控通常包括相互... 更多还原【Abstra
3、ct】EukaryoticPre-mRNAsalwaysundergoesseriesofpost-transcriptionalmodificationinordertobecomefunctionalmRNAs,including5’capprocessing,3’polyadenylation,RNAeditingandalternativesplicingetal.Thealternativesplicingofpre-mRNAsdramaticallyincreasesthediversityofproteinsandthe
4、complexityofgenesexpression.Anotablefeatureofeukaryoticpre-mRNAintronsistherelativelyhighlevelofconservationoftheprimarysequencesof5’and3’splicesitesoveragreatrangeof... 更多还原【关键词】14-3-3ξ基因；复制外显子；转录后加工；选择性剪接；互斥剪接；【Keywords】14-3-3ξgene；duplicatedexons；post-transcriptional
5、processing；alternativesplicing；mutuallyexclusivesplicing；致谢6-7摘要7-8Abstract8-9缩略语10-13第一章选择性剪接13-201.1选择性剪接的普遍性131.2mRNA选择性剪接的基本机制13-161.3mRNA选择性剪接的调控机制16-171.3.1选择性剪接的顺式调控161.3.2选择性剪接的反式调节161.3.3RNA编辑对选择性剪接的调控作用16-171.4选择性剪接的几种常见形式171.5互斥剪接——一种特殊的选择性剪接17-191.5.1互斥外显子17
6、-181.5.2互斥剪接18-191.6mRNA选择性剪接的生物学意义191.7选择性剪接与疾病19-20第二章14-3-3蛋白20-262.1概述202.2发现和命名20-212.314-3-3家族的发生和序列保守性21-222.3.1假基因212.3.214-3-3序列和结构的独特性21-222.414-3-3二聚体的结构及其相互作用222.514-3-3结合基序22-242.6总结24-26第三章实验方案26-283.1实验目的与意义263.2研究内容26-273.2.1D.melanogaster14-3-3ξ基因的克隆263
7、.2.2对目的片段进行PCR定点突变263.2.3构建突变体的pMT/V5表达载体并在果蝇细胞中进行表达26-273.3技术路线27-28第四章D.melanogaster14-3-3ξ外显子5选择性剪接的研究28-694.1材料与试剂28-304.2实验方法30-514.2.1目的基因序列的搜索及引物设计和合成30-314.2.2模板制备31-364.2.3嵌合外显子上游内含子区的点突变载体的构建36-444.2.4外显子上部分序列突变体的构建44-484.2.5将构建好的pMT/V5突变体转染果蝇S2细胞48-514.3结果与分析
8、51-664.3.1果蝇基因组的提取和目的基因片段的扩增51-534.3.2嵌合外显子上游内含子区的点突变对选择性剪接的影响53-604.3.3外显子上部分序列突变对选择性剪接的影响60-664.4讨论66-69参考文献
