肉汤琼脂培养基使用说明

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1、编号：022020　　品种名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(NutrientAgar)　　用途：　　用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003中4.7，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995)。　　原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。图鉴：　　配方(每升)：　　蛋白胨10g　　牛肉膏粉3g　　氯化钠5g　　琼脂15g　　最终pH7.3±0.2　　使用方法：　　1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶

2、解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。　　2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。　　3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。　　4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于3

3、6±1℃温箱中培养48±2h。　　5、观察结果。　　6、菌落计数方法：　　做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。　　7、菌落计数的报告：　　选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个

4、菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计　　A：稀释度的选择：　　应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。　　若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。　　若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。　　若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。　　若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(

5、见表中例6)。　　若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。　　菌落数的报告：　　菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。　　稀释度选择及菌落数报告方式　　例次　　稀释液及菌落数　　　　　　　　两稀释液之比　　菌落总数个/g或mL　　报告方式个/g或mL　　10-1　　　　10-2　　　　10-3　　1　　多不可计　　164　　　　

6、　20　　　　——　　　　　　16400　　　　　16000或1.6×104　　2　　多不可计　　295　　　　　46　　　　1.6　　　　　　　37750　　　　　38000或3.8×104　　3　　多不可计　　271　　　　　602.2　　——　　　　　　　27100　　　　27000或2.7×104　　4　　多不可计　　多不可计　　　313　　　——　　　　　　31300　　　　310000或3.1×105　　5　　27　　　　　　11　　　　　5　　　　——　　　　　　270　　　　　　270或2.7×102　　6　　0　　　　　　0　　　　　　0　　　　——　　　　　　<1

7、×10　　　　　　　　<10　　7　　多不可计　　　305　　　　12　　　　——　　　　　　30500　　　　　31000或3.1×104　　质量控制：　　本品接种下列菌株，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h，结果如下：　　菌名　　　　　　菌号　　　　　生长状况　　菌落特征　　大肠埃希氏菌　　ATCC25922　　　　良好　　　　白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。　　金黄色葡萄球菌　ATCC6538　　　　良好　　　　黄色，圆形，边缘整齐，