氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒说明书

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1、氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）说明书【产品名称】通用名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）商品名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）英文名称：RequirementforOxidizedLowDensityLipoproteinDetectionKit（ELISA）【包装规格】96人份/盒；48人份/盒。【预期用途】本品为体外定量检测血液中氧化低密度脂蛋白（OxidizedLowDensityLipoprotein，OxLDL）含量的试剂。【检验原理】本试验采

2、用双抗体夹心直接酶联免疫法。用抗人OxLDL抗体预包被微孔板，使样品中的OxLDL与固相化在微孔板上的抗人OxLDL抗体结合后，将未反应的组分洗脱，再加入酶标记抗体进行酶底物显色，在450nm波长下测定光吸收值，并根据在同一微孔板内反应的校准品制作的剂量-反应曲线，求得样品中OxLDL的含量。【主要组成成份】见表1。表1本试剂盒主要组成成份编号组成规格数量1固相抗体微孔板96孔/48孔1块2OxLDL校准品0，1，2，4，8，16U/ml各1瓶3质控物高、低各1瓶4酶标记抗体100μl1支5浓缩洗

3、涤液（21×）30ml1瓶6浓缩稀释液（5×）10ml1瓶7样品反应液12ml1瓶8底物液A6ml1瓶9底物液B6ml1瓶10终止液6ml1瓶【储存条件及有效期】1、储存条件：2~8℃避光保存。2、有效期：12个月。3、试剂复溶及开瓶/开袋后储存条件及有效期见表2。表2试剂盒组份复溶、配制及开瓶/开袋后储存条件及有效期组份效期及储存条件固相抗体微孔板（开袋后未使用板条）1个月，2~8℃，于封口的铝箔袋中OxLDL校准品（复溶后）1周，2~8℃质控物（复溶后）1周，2~8℃酶标记抗体（稀释后）1天，

4、2~8℃，避光洗涤液（1×）1个月，2~8℃稀释液（1×）1个月，2~8℃底物液（配制后）新鲜配制后使用酶标记抗体（未稀释）12个月，2~8℃，避光洗涤液、稀释液（未稀释）12个月，2~8℃底物液A、B12个月，2~8℃样品反应液、终止液12个月，2~8℃【适用仪器】1、带有单波长检测能力的酶标仪，有450nm滤光片，增益应小于20。2、微孔板清洗器。【样本要求】采集禁食12小时后空腹血，分离血浆或血清。如采用血浆样本建议使用EDTA抗凝血浆。样品在2~8℃可存放一周。由于冻融对检测结果影响较大，

5、故待测样品不能冻存。严重溶血和微生物污染的样本不能使用。【检验方法】1.试剂配制：(1)测定前10分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。(2)将10ml浓缩稀释液（5×）用40ml纯化水稀释至1×。(3)将30ml浓缩洗涤液（21×）用600ml纯化水稀释至1×。(4)校准品的复溶：在OxLDL校准品（0、1、2、4、8、16U/ml）及高、低质控物中分别加入1ml纯化水进行复溶，静置3分钟，摇匀。(5)酶标记抗体工作液：取适量酶标记抗体，用稀释液做125倍稀释，如取80μl酶标记抗体，加入9920

6、μl稀释液，混匀。(6)底物液：取等体积的底物液A和底物液B，充分混匀，临用前配制，如取5ml底物液A加5ml底物液B。2.洗板方法：(1)自动洗板：要求每孔注入洗涤液350μl，注入与吸出间隔15~30秒。(2)手工洗板：倾去孔内液体，每孔加洗涤液350μl，静止30秒后倾去洗涤液，在吸水纸上拍干。3．测定步骤：(1)稀释样品：用稀释液将样品稀释4倍。(2)准备微孔板：撕开密封袋，取出微孔板，去除封板胶纸，用洗涤液洗涤3次，备用。(3)加样：将校准品、质控物和待测样品加入微孔板，25μl/孔，再

7、加入反应液，100μl/孔，37℃下孵育2小时。可参考表3所示加样顺序进行加样。表3加样顺序示例孔样品孔样品1A-B校准品0U/ml3A-B待测样品1C-D校准品1U/ml3C-D待测样品1E-F校准品2U/ml3E-F待测样品1G-H校准品4U/ml3G-H待测样品2A-B校准品8U/ml4A-B待测样品2C-D校准品16U/ml4C-D待测样品2E-F质控物（低）4E-F待测样品2G-H质控物（高）4G-H待测样品(4)洗板5次。(5)加入酶标记抗体工作液，100μl/孔，37℃下孵育1小时。

8、(6)洗板5次。(7)加入底物液，100μl/孔，37℃下避光孵育15分钟。(8)加入终止液，50μl/孔。(9)测定光吸收值：启动酶标仪，于终止反应后30分钟内读数，测定波长450nm。4.试验过程中应注意：(1)严格控制反应时间。(2)在加入试剂时应沿着孔壁加入，以免外溅。(3)配好的底物液要避光。(4)酶标记物含有甘油，较粘稠，要小心加入以确保结果精确。5．质量控制：每个微孔板上至少采用两个浓度的质控物进行质量控制，以确保每个微孔板测定结果的可靠性。(1)0U/ml校准品的光