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1、Selectiveanalysisofhistamineinfoodbymeansofsolid-phaseextractioncleanupandchromatographicseparation通过固相清理和色谱分离提取分析食品中的组胺摘要为了选择性测定和测定测定发酵食品中的组胺含量我们提出了一个简单、实用的技术。该方法涉及包括使用SepPakPlusC-18盒进行固相萃取清理和离子配对反相高效液色(IP-RP-HPLC)分离，其次是在紫外线吸收波长为220nm处检测组胺。蒸发浓缩从食物样本中的甲醇提取物后，由此产生的残渣用0.2M的磷酸盐缓冲(pH值3.0)重新溶解，随
2、后通过盒。从盒中出来以后的在C-18列用IP-RP模式下进行色谱分析，作为固定相，用0.2M磷酸缓冲(pH值3.0)-乙腈-水(1:24:166,v/v)溶液，包含2mM。松藻属于1辛烷磺酸，是作为流动相。当这种方法应用于组胺、尸胺(Cad)、腐胺(Put)、5-羟色胺(5HT)和酪胺(酪氨酸Tyr)的混合物，只有组胺的保留时间是16.4分钟。该方法充分验证和验证参数：线性范围2-1000ppm；相关系数>0.991；平均回收率>99.5%；限制量化2ppm和限制检测0.5ppm。该方法应用于12个品牌的味噌(发酵豆瓣酱)，9个品牌的清酒(米酒)，和5品牌的Shouyu(日本
3、酱油)，来验证检测各种发酵食品中组胺的能力。这种方法被证明既快速又准准确，因此建议用于组胺污染调查和日常实践的食品质量控制中。1、介绍众所周知，过敏如食物中毒和组胺(HA)中毒似乎主要是由组胺引起的，这是酶促降解氨基酸组氨酸产生的,通常食物本身中就有[1]。一般来说，组胺中毒是由于摄取相关种的未加工、冷冻或罐装鱼，例如竹荚鱼等[2]、琥珀鱼[3]和鲭鱼[4]，除了金枪鱼[5-7]和鬼头刀鱼[8]。另一方面,组胺是可食用的鱼类产品质量控制的其中一个“生物标记”。组胺测试可能是一个在HACCP计划中可以使用于海鲜的控制策略。根据合规政策指南#540.525(联邦公报,1995)[
4、9],质量好的鱼含有少于10ppm组胺，组胺水平达到30ppm表明鱼肉质量显著恶化，组胺含量为50ppm时被认为是鱼肉被分解的确凿证据。直到现在，已经有许多种方法来阻止食品产生组胺：酶[10、11]，免疫学[12]和色谱[13]。高效液相色谱仪(HPLC)是最可靠的技术之一，通常应用于鱼和相关类型的样品。在样品是鱼时，妥善进行高效液相色谱在提取组胺时可以给出很好的分析结果，且不需要任何进一步的清理。虽然众所周知相对较高浓度的发酵食品中含有组胺，关于食品中含有组胺的调查报告也只有在最近才公布出来。在做这些调查时我们有时会遇到一个问题，就是当用高效液相色谱方法分析日本的发酵食品样
5、品发现其中含有许多成分。在这种情况下，众多的峰值对应于这些成分有时会干扰组胺峰值的界定。去除这些化合物通常需要用离子交换柱色谱法[14]经过2或3小时的“清理”。根据在本文中的报道，我们开发了一个简单、快速、非常具体、实用的技术用来分析发酵食品中的组胺：通过Sep-PakPlusC-18装前分析清理、离子配对(IP)逆转-相高效液相色谱法(RP)和紫外检测。2、材料和方法2.1试剂和材料组胺和其他试剂采购均从Wako化学有限公司，东京(日本)，最高级别的高效液相色谱-级采用商用，被使用在没有进一步的提纯阳离子中。所有准备水溶液的水使用Milli-Q净化系统净化的水(Milli
6、pore,Milford,MA,USA)。在这项研究中，我们通过用水溶解使浓度为1毫克组胺/100毫升溶液制备了组胺标准溶液,与食品样本中组胺的浓度100ppm对应。一个五个组件生物胺标准溶液包括组胺、尸胺(Cad)、腐胺(Put)、5-羟色胺(5HT)和酪胺(酪氨酸Tyr)，是用水或0.2M磷酸盐缓冲(pH值3.0)溶解，使胺浓度在任何一种情况下都为1毫克/毫升。日本发酵食品、清酒、味噌、Shouyu可以在当地食物商店购买到。2.2高效液相色谱仪高效液相色谱系统由一个智能pu-980泵(Jasco、东京、日本)，用于高压权力平等的模式洗脱。一个20-l样品加载有Rheody
7、ne注射器加载阀(Reodyne,CA,USA)与20-l注射试样循环或50-l微升注射器(Hamilton,HamiltonCompany,Reno,NV,USA)。分析柱是AsahipakODP-50(150×6.0innerdiameter;ShowaDenkoK.K.,Tokyo,Japan)。柱形物维持在45◦CinaCO-965柱温箱(Jasco)。一个流动相，0.2M磷酸盐缓冲剂(pH3.0)乙腈水(1:24:166,v/v)，它包含一个离子配对试剂、2Mm辛烷磺酸钠，脱气是通过aDG-9
