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《人参皂甙rh2 注射液对荷肝癌( h22) 小鼠免疫功能的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、人参皂甙Rh2注射液对荷肝癌(H22)小鼠免疫功能的影响葛迎春,李晨燕,任慧君,马天舒,刘 平(大连市中医研究所,大连116013)作者简介:葛迎春(1961-),女,长春市人,副研究员,从事中药细胞药理学研究。出自：特产研究SpecialWildEconomicAnimalandPlantResearch2002年第3期文章编号:1001-4721(2002)03-0004-04摘 要:本研究以荷肝癌(H22)小鼠为实验模型,观察人参皂甙Rh2注射液对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素、NK细胞毒活性和IL-2免疫指标的影响。结果表明:人参皂甙Rh2
2、注射液能提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、增加血清溶血素抗体生成能力、促进小鼠脾NK细胞杀伤活性和IL-2活性。人参皂甙Rh2注射液明显提高荷瘤小鼠免疫功能。关键词:人参皂甙Rh2;免疫功能;H22肝癌瘤株中图分类号:R285.5 文献标识码:A人参具有广泛的药理作用,以往研究表明:人参能提高机体的免疫力[1]。本研究以H22荷瘤小鼠为实验模型,进一步观察人参皂甙Rh2注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响。1 材料和方法1.1 动物 昆明种小白鼠60只,体重20.74±0.77g,雌雄各半,由大连市药品检定所动物实验基地提供;H22肝癌瘤株由中国医学科学院药
3、物研究所肿瘤室提供;淋巴细胞(YAC-1)购自武汉大学菌种保藏中心。1.2 仪器和试剂 PRMI-1640培养基(Gibco,USA);胎牛血清(FCS,中国医学科学院血液研究所购进,批号:200004);曲拉通(TritonX100,Sigma);还原型辅酶I(CoI,NADH,Sigma);阳性对照药:环磷酰胺(CP,上海第十二制药厂,批号:011015);人参皂甙Rh2注射液、无色透明液体,由吉林省中医中药研究院提供,批号:010615;鸡红细胞;Giemsa染色液。CO2培养箱(SANYO,MCO-175M,Japan);超净工作台(CJ-1,苏州长
4、桥净化设备厂):紫外光度计(TU-1221,北京瑞利分析仪器厂);自动酶标度仪(CliniBio,EC);倒置显微镜(OLYPUS,Japan);生物学显微镜;96/24孔培养板(Costar,USA);微量血凝计数板,离心机。1.3 实验分组 实验随机分成6组:正常对照组;无菌操作取荷肝癌(H22)小鼠腹水,用0.9%生理盐水稀释至含1×107/ml,每只右腋皮下接种0.2ml(2×106/只)随机分成H22荷瘤对照组;H22阳性对照组(环磷酰胺,CP);H22人参皂甙Rh2注射液高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组10只。1.4 实验方法1.4.1 人参皂
5、甙Rh2注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 给药方法:小鼠接种瘤细胞24h后开始给药,正常对照组(注射等体积的生理盐水);H22荷瘤对照组(注射等体积的生理盐水);H22阳性对照组(腹腔注射CP,20mg/kg×3,间隔3d1次);H22人参皂甙Rh2注射液高剂量组(40mg/kg)、中剂量组(20mg/kg)、低剂量组(10mg/kg),每日静脉注射1次,连续给药5d,免疫动物后继续给药5d,体积均为0.1ml/只。细胞悬液制备:取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中,朝一个方向充分摇动,以脱纤维,用生理盐水洗涤3次,离心2000r/min,10min,弃上清,
6、用生理盐水配成20%(V/V)的鸡红细胞悬液。吞噬功能测定:末次给药后,次日清晨每只鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml,轻柔腹部,30min后,颈椎脱臼处死动物,立即开腹吸取腹腔液滴在玻片上约0.2ml,玻片置入37℃,孵育30min后,再用生理盐水中漂洗,除去未贴片细胞,晾干,以1∶1丙酮甲醇溶液固定,4%(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min,蒸馏水漂洗晾干。显微镜下结果判定:油镜下计数巨噬细胞,每张计数100个,计算吞噬百分率和吞噬指数。1.4.2 人参皂甙Rh2注射液对小鼠体液免疫的影响———血清溶血素测定血凝法SRBC:绵羊颈静脉取血,将羊
7、血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中,朝一个方向摇动,以脱纤维,放入4℃冰箱保存备用,可保存2周。免疫动物及血清分离:取羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心2000r/min,10min,将压积SRBC用生理盐水配成2%(V/V)的细胞悬液,每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫,5d后,摘除眼球取血于离心管中,放置约1h,将凝固血与管壁剥离,使血清充分析出,2000r/min,10min,收集血清。凝集反应:用生理盐水将血清倍比稀释,将不同稀释浓度的血清分别置于微量试验板内,每孔100μl,再加入100μl0.5%(v/v)的SRBC悬液,混匀,装入湿润的平盘内加盖,于3
8、7℃温箱孵育3h,观察血球凝集程度。1.4.3 人参
