花卉苗木脱毒技术

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1、现在许多科研单位和花木生产企业都已配置了组织培养室。组培技术已成为重要的生物技术之一。然而有的组培室组培苗的数量和质量却一直没有质的飞跃，究其原因，最主要的因素就是污染所造成的。被污染后首先是生产成本的提高；其二，对植株造成伤害；其三，增加接种源受污染的机率。　　一、常见污染源　　组织培养过程中的污染源主要有以下几种：（1）户外风大，菌类进屋机会多。有风就有沙，有沙就有尘，有尘就有菌，菌尘共存，这是菌类进屋的主要原因之一。（2）屋内太潮，菌类繁衍多。需保持室内空气干燥，如使用空调“除湿”功能，也可减少真菌生长繁殖。（3）人员带菌多。在整个操作室内，人员可说是最大的带菌者，不管在毛

2、发或是衣服等地方，都隐藏着数不清的菌类。在进入操作室前，最好能对作业人员进行清洁处理，比如换上干净的白大褂，换上实验室的鞋，衣服鞋每星期洗一次，上超净台前手要用肥皂清洗两遍，接种前手再用酒精擦拭一遍。（4）屋内不干净。紫外线能杀灭或抑制真菌生长，因此应在每次接种前进行20分钟的紫外灯消毒。（5）清理屋内带菌组培苗。在植物病害中，真菌所引起的病害尤其严重，且因会产生孢子，随着空气飘散。一旦落入适当的环境下，一粒小小的孢子便会扩大成一个菌落，污染整个组织培养瓶。因此一旦有真菌污染的组培苗，就要用高压灭菌器彻底消灭，以防扩散。（6）接种不正确。不正确操作也会增加污染机率，如开盖太快，灭

3、菌不够，操作过慢等。接种过程应该轻开盖，快操作。　　二、污染原因及污染苗抢救　　若污染菌类是零星分散在培养基中，则可确定是人为引起的污染，比如培养基灭菌不彻底；超净工作台长时间不换滤网，致使净化能力降低；接种用具灭菌不彻底；操作不正确，动作生硬缓慢，开瓶时间太久，接种台摆放物品杂乱，操作中心在人体范围之内；接种室长期不灭菌，菌类太多等。　　若污染菌类是从材料周围长起，则可证明是植物材料带菌引起。可能是接种用具灭菌不彻底，接种时材料被污染；或者是未及时发现污染苗，接种过程交叉感染等。　　若菌类从材料培养基以上部分长起，而不是从培养基先长起，且发生在5天以后，则说明是材料带的内生菌。

4、若从培养基以下开始长菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的污染，原因可能是灭完菌后，未剪去两个切口或虽剪但器具带菌。　　真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉，即使仅形成菌丝也应处理后扔掉，因为菌丝能够达到材料内部，因此，真菌污染是灭绝性的。如果是细菌污染，由于细菌繁殖是靠芽孢，细菌不会弥散在整个空间，因此只要及时发现，可将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可以用。用抗生素等杀菌药剂进行处理，这种方式虽有不少报道，但至今还未发现那种抗生素能够对各种菌都有效，并且也会影响植物材料的正常生长分化。还有一些药剂虽然杀菌效果好，但往往容易引起盐害，也无法利

5、用。花卉苗木脱毒技术   病毒病害严重影响着植物的生长发育，特别是通过嫁接、扦插、 根繁等常规无性繁殖的植物。由于病毒是通过维管束传导的，因此就 会利用有维管束的营养体繁殖，把病毒传递下去，并且逐代积累，使 病毒浓度越来越高。 　　由于目前尚未找到一种对防治病毒病很有效的化学药品，所以从 植物本身入手，使之无毒化已成为解决病毒病害问题的首选。国内外 大量的研究和生产实践表明，脱病毒植株的性状明显优于感病植株。 国外的许多果树花卉等作物都已实现无毒化栽培，并由此产生了巨大 的经济效益。 　　植物脱病毒通常可采用热处理、茎尖培养、茎尖微芽嫁接、热处 理配合茎尖培养、热处理配合茎尖微芽

6、嫁接等方法达到脱毒目的。热 处理脱毒主要是利用有些病毒受热的不稳定性而使其失去活性，从而 达到脱病毒的目的。一般采用35℃至55℃的热水或高温蒸气、高温空 气处理，温度越高处理的时间越短。人们常将热处理中生长的新梢顶 端嫩枝嫁接到无病毒砧木上，或进行进一步的茎尖培养或茎尖微芽嫁 接以增大脱毒几率。 　　茎尖培养之所以能够除去病毒，是由于病毒主要是通过维管束传 导的，所以在感病植株内的分布是不一致的。维管束越发达的部位， 病毒分布越多。由于生长点内无组织分化，即尚未分化出维管束，所 以不存在病毒。把茎尖生长点接种在适宜的培养基上进行组织培养， 就能培养出无病毒植株。实验证明，茎尖培

7、养脱毒效果好，后代遗传 性稳定，还可同时脱除类病毒、细菌和真菌。 　　茎尖微芽嫁接法脱病毒是茎尖培养脱毒的一种改良方法，这种方 法主要用于那些茎尖培养较困难的植物。所谓茎尖微芽嫁接就是在无 菌条件下，将切取的茎尖经组织培养后嫁接到去顶的实生苗上。（由 于实生苗是通过种子繁殖的，所以不带病毒）。待茎尖发育后，即可 获得具有茎尖母本性状的无病毒植株。 　　通过以上方法培育出的苗木，还需要经过严格的鉴定，证明确实 无病毒存在，才是真正的无病毒苗。常用的鉴定方法有指示植物法、 抗血清鉴定