毕赤酵母的培养基1

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1、毕赤酵母的培养巴斯德毕赤酵母是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体。比赤酵母表达常用的培养基：1LB培养基胰蛋白胨1%酵母粉0.5%氯化钠1%PH7.0----------------大肠杆菌培养制作平板加入2%的琼脂粉，121摄氏度20分钟，可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin25ug/mL（博来霉素，抗菌素）宿主细胞His------------诱变造成的。MD------------酵母转化

2、筛选培养基（营养缺陷型His-）13.4g/L酵母基本氮源；0.4mg/L生物素；20g/L葡萄糖用于表达的毕赤酵母都属于组氨酸缺陷型的只有染色体上成功整合入重组质粒载体基因的毕赤酵母菌株才能在组氨酸缺失的MD培养基生长，以此筛选出重组子。MM--------------酵母转化进一步筛选培养基仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，成为基本培养基（minimalmedium,MM），有时用符号“[－]”来表示。不同微生物的基本培养基是不相同的。2LLB培养基胰蛋白胨1%酵母粉0.5%氯化钠0.5%PH7.0制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存数月。用于培养

3、pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin25ug/ml，可以4℃条件下保存1～2周.3YPD培养基酵母粉1%，胰蛋白胨2%，葡萄糖2%，固体加2%的琼脂粉，YPD培养基可常温保存,是毕赤酵母的最基本培养基，琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin100ug/ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。4BMGY培养基 酵母粉1%蛋白胨2%，磷酸钾缓冲溶液平PH6100mmol/LYNB（酵母氮源）1.34%生物素（4×10-5）%甘油1%，毕赤酵母诱导表达前培养基，YNB和Biotin过滤除菌。培养24小时后，一般静置过夜，待酵母沉淀后倒掉BMGY培养

4、基，改换BMMY培养基，进入诱导表达阶段。5BMMY培养基酵母粉1%蛋白胨2%，磷酸钾缓冲溶液平PH6100mmol/LYNB1.34%生物素（4×10-5）%甘油1%甲醇3%，毕赤酵母诱导表达培养基，YNB和Biotin过滤除菌。摇瓶培养时每24小时之后加入3%的甲醇诱导，一般诱导72小时。6YPDS+Zeocin培养基酵母粉1%蛋白胨2%葡萄糖2%，山梨醇1M,琼脂2%，博来霉素100mg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS+Zeocin培养基，都必须存放4℃条件下，有效 1-2周。7MGY培养基34%YNB,1%甘油，4×10-5%生物素，将800ml灭菌水、100ml的10

5、YNB母液、2ml的500B母液和100ml的10GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。8MGYH培养基MGY培养基+0.004%的组氨酸MGYH在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。9RD-5RegenerationDextroseMedium（葡萄糖再生培养基）（含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；410%生物素；0.005%氨基酸）（1）.将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌；（2）.冷却后于45℃水浴；（3）.将100ml的10D、100ml的10YNB；2ml的500B；10ml的100AA等母

6、液和88ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤2的山梨醇溶液混合。4℃保存。10RDHRegenerationDextroseMedium+Histidine（葡萄糖再生培养基+0.004%组氨酸）在RD培养基配制的第三步中，在加入10ml的100H母液，同时无菌水的体积减少至78ml即可，其余配制方法与RD相同。4℃保存。11RD及RDH平板的制备1.将186g的山梨醇和15~20g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；2.参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，100ml的10D、将100ml的10YNB；的500B；2ml10ml的100AA等母液、（10ml的100

7、H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；3.迅速制备平板。4℃可保存数月。12RD及RDH的TOP琼脂的制备（常用于酵母菌的包被）琼脂的制备（常用于酵母菌的包被）（1）.将186g的山梨醇和7.5~10g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；琼脂粉60℃（2）.参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，100ml的10D、将100ml的10YNB；的500B；2m