紫外-可见分光光度法标准操作规程

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1、文件名称紫外-可见分光光度法文件编码KYFX-YQCZSOP-021编制人编制日期年月日颁发部门科研部审核人审核日期年月日复印号批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门紫外-可见分光光度法标准操作规程1简述紫外光-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外

2、光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区(200～400nm)或可见光区(400～850nm)产生吸收。通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190～900nm，紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯—比尔(Lambert-Beer)定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=l

3、og（1/T）=Ecl式中：A为吸光度；T为透光率；E为吸收系数；c为溶液浓度；l为光路长度。如溶液的浓度(c)为1%(g/ml)，光路长度(l)为1cm，相应的吸光度即为吸收系数，以表示。如溶液的浓度(c)为摩尔浓度(mol/L)，光路长度为lcm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。2仪器紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。电热恒温水浴锅标准操作规程第7页共7页文件名称紫外-可见分光光度法文

4、件编码KYFX-YQCZSOP-021编制人编制日期年月日颁发部门科研部审核人审核日期年月日复印号批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成，色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200～400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。检测器有光电管和光电倍增管二种。紫外-可见分光光度计依据

5、其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成样品(S)和参比(R)两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。3紫外-可见分光光度计的检定3.1波长准确度3.1.1波长准确度的允差范围紫外-可见

6、分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1.0nm，500nm处±2.0nm。3.1.2波长准确度检定方法3.1.2.1用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯(用笔式汞灯最方便)直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”(如15nm/min)、响应“快”、最小狭缝宽度(如0.1nm)、量程0～100%，在200～800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值(若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描)。单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100(或选择开关放在×1，

7、透光率放在10)，关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝，如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波长方向移动，则应反时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。用于检定紫外-可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83，253.65，275.28，296.73，302.15，313.16，334.15，365.02，365.48，366.33，404.66(紫色)，435.83(蓝