GBT 26612-2011 纯血马DNA亲子鉴定技术规程

《GBT 26612-2011 纯血马DNA亲子鉴定技术规程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS6502030B43a目中华人民共和国国家标准GB／T26612—2011纯血马DNA亲子鉴定技术规程ProceduresofThoroughbredparentageverificationwithDNAtestingtechniques2011—06-16发布2011—11—01实施宰瞀粥紫瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会“19刖菁本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业大学马研究中心、中国马业协会。本标准主要起草人：赵春江、吴常信、韩国才

2、、张浩、吴克亮、杜丹、韩文朋GB／T26612—20范围纯血马DNA亲子鉴定技术规程本标准规定了纯血马DNA亲子鉴定所用的方法、过程、结果的记录和解读等本标准适用于纯血马的亲子鉴定。2规范性引用文件GB／T26612—20下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其撮新版本适用于本标准。GA／T383法庭科学DNA实验室检验规范SN／T1119进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR

3、方法SN／T1193基因检验实验室技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31纯血马Thoroughbred符合国际纯血马登记委员会(InternationalStudBookCommittee，ISBC)规定、在ISBC批准的成员国登记委员会登记了的马匹。32镦卫星DNA亲子鉴定方法IOarentagelestJngwithDNAtechnique以微卫星DNA多态性及孟德尔遗传规律为基础的亲子鉴定方法。4原理根据微卫星DNA的侧翼序列设计引物，对微卫星DNA位点进行扩增，其中包括国际动物遗传协会(InternationalSocietyofAnimalGene

4、tics，ISAG)和ISBC要求的九个微卫星位点。通过凝胶电泳判定个体的基因型。根据盂德尔遗传规律，比对亲代个体和子代个体各微卫星DNA位点的基因型是否相符，从而达到亲子鉴定的目的。5试剂与器材51试剂511乙醇(ethan01)，分析纯。5．1．2异丙醇(isopropan01)，分析纯。5．1．3氢氧化铺(NaOH)，分析纯。5．14乙二胺四乙酸二钠(EDTA)，分析纯5．15氯化钠(NaCI)，分析纯。5．1．6十二烷基硫酸钠(SDS)，分析纯。5．1．7乙酸钾(CH。COOK)，分析纯。5．1．8氧化锂(LiCl)，分析纯。GB／T26612—205．1．9氯化

5、钾(KCl)，分析纯。5．110氧化镁(MgCI。)，分析纯。51．1130％(质量分数)丙烯酰胺溶液：将29％丙烯酰胺和1％N，N’一亚甲双丙烯酰胺溶于去离子水，充分搅拌溶解井过滤去杂质，避光保存。5．112过硫酸铵，分析纯。5．113硼酸(boricacid)，分析纯。5．114乙酸，分析纯。5．1．15甘油，分析纯。5116四硼酸钠，分析纯。5．117硝酸银(AgNOa)，分析纯。51．18甲醛，分析纯。5．1．19溴化乙锭，分析纯。51．20TaqDNA聚合酶。51．21溴酚蓝，分析纯。51．22盐酸(HCI)，分析纯。51．23三(羟基甲基)氨基甲烷(TrisB

6、ase)，分析纯。51．24Tris—HCI：由TrisBase和HCI组成的缓冲溶液。5125三磷酸脱氧核苷酸混合物(dNTPs)：等量的三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGTP)、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸(dATP)、三磷酸胸腺嘧啶脱氧棱苷酸(dTTP)、三磷酸胞嘧啶脱氧棱苷酸(dCTP)的混合物。5{26毛囊裂解液：200mmol／LNaOH。5127中和液：200mmol／LHCI，100mmol／LTri}HCI，pH85。5128缓冲液：a)血液裂解缓冲液(BufferA)：100mmol／LTrisHCI(pH75)，100mmol／LED强，100mmol／LNaC

7、I，0．5％(质量分数)SDS；b)蛋白沉淀缓冲液(BufferB)：200mL5mol／LCHsCOOK，500mL6mol／LLiCI混匀后使用；c)DNA溶解缓冲液(TE)：10mmol／LTri}HCI，1mmol／LEDTA．pH=80jd)电泳解缓冲液5×TBE：446mmol／LTrisBase，445mmoI／LBoricAcid，10mmol／LEDTA(pH8．O)；e)电泳解缓冲液50×TAE：2mol／LTris碱，lmol／L冰乙酸，0．1mol／LEDTA(pH8一o)；I)上样缓冲液；30mmol