德州驴DNA亲子鉴定技术规程

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1、T/CAAA××××—2018中国畜牧业协会团体标准T/CAAAXXXX-20182018××-××实施2018××-××发布中国畜牧业协会发布T/CAAA德州驴DNA亲子鉴定技术规程TechnicalSpecificationforDNAParentageIdentificationinDEZHOUDonkeyDB65ICS中国标准文献分类号ⅠT/CAAA××××—2018ⅠT/CAAA××××—2018ⅠT/CAAA××××—2018前言本标准根据GB/T1.1—2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》相关要求制定。本标

2、准由中国畜牧业协会提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：东阿阿胶股份有限公司、中国农业大学、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、山东农业科学院奶牛研究中心、山东东阿黑毛驴牧业科技有限公司。本标准主要起草人：张新浩、赵春江、李海静、嵇传良、周祥山、杨莉、张莉、王长法、王敏、吕鑫、刘宇、崔冉、韩思勇、胡元岭、赵志超。ⅠT/CAAA××××—2018德州驴DNA亲子鉴定技术规程1范围本标准规定了德州驴DNA亲子鉴定的技术方法及结果分析等内容。本标准适用于德州驴亲子鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款对于本标准是必不可少

3、的。凡是标注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不标注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GA/T383法庭科学DNA实验室检验规范SN/T1193基因检验实验室技术要求SN/T1119-2002进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1亲子鉴定parentageidentification利用分子遗传学、生物学及医学的理论和技术判断亲代与子代是否具有血缘关系。3.2微卫星DNA标记DNAmicrosatel

4、lite又称为短串联重复序列(shorttandemrepeats,STRs)或简单重复序列（simplesequencerepeats），是分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由2～6个核苷酸的串联重复片段构成。重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富。4鉴定原理根据微卫星DNA的侧翼保守序列设计荧光标记引物，通过多重PCR技术扩增不同个体的微卫星DNA位点。通过分型技术检测微卫星DNA标记的遗传多态性。分析亲代个体和子代个体各微卫星标记的基因型是否相符，以达到鉴定亲子关系的目的。5主要试剂配置及器材5.1试剂5.1.1乙二胺

5、四乙酸二纳（EDTA），分析纯5.1.2乙醇（Ethanol），分析纯7T/CAAA××××—20185.1.3异丙醇（Isopropanol），分析纯5.1.4氢氧化钠（NaOH），分析纯5.1.5冰醋酸（CH3COOH），分析纯5.1.6十二烷基硫酸钠（SDS），分析纯5.1.7氯化钠（NaCl），分析纯5.1.8乙酸钾（CH3COOK），分析纯5.1.9琼脂糖（Agarose）5.1.10盐酸（HCl），分析纯5.1.11溴酚蓝（BPB），分析纯5.1.12二甲苯（FF），分析纯5.1.13蔗糖（Sucrose），分析纯5.1.14缓

6、冲液a、血液裂解缓冲液（BufferA）：100mMTris-Hcl（PH7.5），100mMEDTA，100mM氯化钠，0.5%SDS；b、蛋白沉淀缓冲液（BufferB）：200ml5MCH3COOH，500ml6MLiCl；c、DNA溶解缓冲液（TE）：10MTris-HCl，d、电泳缓冲液50×TAE：2MTris-base，1M冰乙酸，0.1MEDTA（PH8.0）；除另有规定外，标准中所使用试剂均为分析纯，水为参见GB/T6682的双蒸水；高压灭菌条件为：1.034×105Pa、121℃、20min。e、琼脂糖电泳缓冲液：0.2

7、5%溴酚蓝，0.25%二甲苯菁FF，40%的蔗糖水溶液。5.2器材5.2.1单道可调移液器2.5μl，10μl，100μl，200μl，1000μl，5ml5.2.2离心机，最高转数14000r/min5.2.3电子天平，可精确到0.001g5.2.4旋转混匀器5.2.5PCR扩增仪0.2ml×96孔5.2.6恒温水浴锅5.2.7蛋白质核酸分析仪5.2.11微波炉5.2.12冰箱7T/CAAA××××—20185.2.13高压灭菌锅，温度范围45℃~135℃，最大压力0.255Mpa2亲子鉴定规程6.1样本采集使用EDTA抗凝管静脉采集血样

8、2ml~5ml或带有毛囊的毛发，4℃或-20℃保存。6.2DNA提取采用试剂盒法从全血中提取基因组DNA。具体方法参见附录A。DNA提取操作的注意事项参见SN/T1193-200