最新细菌性食物中毒的快速检验PPT教学课件.ppt

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1、定义食源性疾病世界卫生组织将食源性疾病定义为“凡是通过摄食而进入人体的病原体，使人体患感染性或中毒性疾病，统称为食源性疾病”9/17/20212定义食物中毒食物中毒是指人摄人了含有生物性、化学性有毒有害物质后或把有毒有害物质当作食物摄入后所出现的而非传染性的急性或亚急性疾病，属于食源性疾病的范畴。食物中毒既不包括因暴饮暴食而引起的急性胃肠炎、食源性肠道传染病(如伤寒)和寄生虫病(如囊虫病)，也不包括因一次大量或者长期少量摄入某些有毒有害物质而引起的以慢性毒性为主要特征(如致畸、致癌、致突变)的疾病。9/

2、17/20213食物中毒诊断标准主要以流行病学调查资料及病人的潜伏期和中毒的特有表现为依据，实验室诊断是为了确定中毒的病因而进行的。食物中毒诊断标准及技术处理总则GB14938-19949/17/20214中毒特征名称常见食物潜伏期病程主要症状重点采集标本沙门氏菌肉蛋类4-48h3-7d恶心呕吐腹痛腹泻发热38-40℃便食品血副溶血弧菌水产品3-24h1-3d呕吐发热腹痛以上腹部为主水样便腹泻便食品变形杆菌肉蛋及水产品5-18h1-3d恶心呕吐腹痛腹泻发热38℃左右食品便致泻性大肠凉拌菜4-44h1-3

3、d呕吐腹痛腹泻水样便或粘液便发热<39℃便食品蜡样芽孢杆菌米饭、肉、乳呕吐型0.5-5h腹泻型8-16h1d恶心呕吐为主腹痛腹泻为主食品呕吐物葡萄球菌肉、乳、蛋2-4h1-2d恶心频繁剧烈呕吐腹痛腹泻食品呕吐物粪链球菌肉、乳、蛋、冷冻食品5-10h1-2d恶心呕吐腹痛腹泻食品呕吐物粪便肉毒梭菌罐头、腌制品1-7d2-20d吞咽困难复视失音呼吸困难食品呕吐物血液9/17/20215细菌性食物中毒检验采集样品检验程序直接涂片、染色、镜检→活菌数测定→选择适当的增菌和鉴别培养基进行分离培养→生化鉴定→血清学鉴

4、定→毒素测定。9/17/20216酶联荧光免疫分析法此E.coliO157:H7的抗原鉴别是基于在VIDAS仪器内进行的酶联荧光免疫分析。像吸液管的装置是固相容器（SPR），在分析中既作为固相也作为吸液器。SPR包被有高特异的单克隆抗体混合物。将一定量的增菌肉汤加入试剂条，肉汤中的混合物在特定时间内循环于SPR内外。如果有E.coliO157:H7抗原存在则与包被在SPR内的单克隆抗体结合，其他没有结合上的化合物被冲洗掉。结合有碱性磷酸酶的抗体在SPR内外循环与结合在SPR内壁上的E.coliO157:

5、H7抗原结合，最后的冲洗步骤将没有结合的接合剂冲洗掉。底物—4-甲基伞形磷酸酮被SPR壁上的酶转换成荧光产物—4-甲基伞形酮。荧光强度由光学扫描器测定。实验结果由计算机自动分析，产生基于荧光测试的试验值与标准相比较后打印出每一个被测样品的阳性或阴性结果报告。9/17/20217分子生物学检验技术聚合酶链反应聚合酶链反应是在体外酶促扩增特定DNA或RNA片段的技术由变性Templatedenaturation退火Primerannealing延伸Primerextension三个基本步骤构成9/17/20

6、218体系组成一段长的双链DNA，是待扩增的目的片段，作为扩增反应的原始模板(template)两段单链寡核苷酸，其序列与待扩增片段的两端相同，作为反应的引物(primer)有四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）作为合成DNA的原料有DNA聚合酶(polymerase)，催化DNA的合成有合适的盐、缓冲液以及温度循环参数，以提供酶促反应的最佳条件并保证反应的产量。9/17/202199/17/2021109/17/2021119/17/2021129/17/2021139/17/2021149/17/202

7、115在PCR体系中，相对于模板DNA，引物大量过剩，模板变性后退火时，它们以3’末端相对分别结合于模板DNA的两条互补链上，在DNA聚合酶催化下，合成新的、引物对之间的DNA片段。在第一个循环中，以两条互补的DNA为模板，从引物3'端开始延伸，其5'端是固定的，3’端则没有固定的止点，随延伸时间的增加而增长，因此该循环的产物长度是不定的；9/17/202116二、PCR技术的特点高特异性：PCR反应的特异性决定因素为：①以碱基配对原则使引物与模板DNA特异正确的结合；②DNA聚合酶合成反应的忠实性；③

8、靶基因的特异性与保守性9/17/202117高灵敏度：PCR产物量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在细菌的检测中，最小检出率为3个细菌；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个PFU(空斑形成单位)。9/17/202118PCR反应五要素的优化1、多聚核苷酸引物2、TaqDNA聚合酶3、dNTP（三磷酸脱氧核苷酸）4、模板核酸5、缓冲液9/