uplc指纹图谱技术结合毒性成分含量优选苍耳子炮制工艺

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1、UPLC指纹图谱技术结合毒性成分含量优选苍耳子炮制工艺　　[摘要]通过16个不同工艺炮制样品水提取部位的UPLC指纹图谱和毒性成分含量比较，优选苍耳子炒制的最佳工艺。UPLC指纹图谱色谱条件为AcquityBEHC18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流动相乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱；流速0.25mL·min-1；检测波长327nm。毒性成分含量测定的色谱条件为AgilentTC-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相甲醇-0.01mol·L-1磷酸二氢钠溶液（35∶65）；流速

2、1.0mL·min-1；检测波长203nm。实验建立了16个不同工艺样品的UPLC指纹图谱，并对其分别采用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》、SPSS16.0软件和SIMCA13.0软件进行相似度分析、聚类分析和主成分分析；16个炮制样品相似度均大于0.97；聚类分析表明炮制样品可大致聚成4类；主成分分析结果认为影响最明显的3个成分分别是绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸和咖啡酸；毒性成分含量测定结果表明炮制后毒性成分明显降低，炮制可起到减毒作用；该实验方法可用于优选苍耳子的炮制工艺。[关键词]指纹图谱；毒性成分；苍

3、耳子；炮制工艺17苍耳子是临床常用中药之一，其名苍耳子最早出现于唐代医药学家孙思邈所著《千金·食治》一书，但在我国最早的药物学专著《神农本草经》一书中就以葈耳实之名收载，并列为中品[1]。《中国药典》2010年版项下收载其来源于菊科植物苍耳XauthiumsibiricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实，规定其常用量3～10g，并应炮制后入药[2]。苍耳子生品有毒，如炮制不当、未经炮制使用或用量过大（单次剂量超过30g）均可引起中毒，甚至死亡[3]。现代研究表明，苍耳子所含化学成分较多，已明确的有效成分有绿原酸

4、、咖啡酸等多种酚酸类[4]，毒性成分有水溶性苷类包括羧基苍术苷、苍术苷及其衍生物等[5]。课题组前期对苍耳子的醇提部位指纹图谱和炮制前后酚酸类成分含量变化已进行了系统比较。由于苍耳子临床用药多以炮制品水煎入药，故本实验以苍耳子水提部位指纹图谱的多方法评价，结合毒性成分羧基苍术苷和苍术苷的含量变化为指标，优选其炮制工艺，为其炮制工艺和减毒增效的机制研究提供了实验证据。1材料WatersAcquityUPLCH-Class超高效液相色谱系统，配有四元超高压溶剂系统、自动进样恒温样本管理器、柱温箱、PDA检测器和Emp

5、ower2色谱工作站（美国Waters公司）；KQ3200DB型超声清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；XFB-200型高速中药粉碎机（吉首市中州制药机械厂）；BP211D型电子天平（德国Sartorius公司），YM-902型高精密度防泼水PH计（姜堰市樱明仪器仪表有限公司）。17对照品绿原酸（110753-200413），咖啡酸（110885-200102）和阿魏酸（110773-201313）购自中国食品药品检定研究院；1，3-二咖啡酰奎宁酸（11042905），3，4-二咖啡酰奎宁酸（12041114），

6、3，5-二咖啡酰奎宁酸（12101101），4，5-二咖啡酰奎宁酸（11081803），隐绿原酸（11112203）和新绿原酸（11112202）均购自成都曼斯特化工有限公司；羧基苍术苷和苍术苷对照品自制，经1H-NMR，13C-NMR，MS，IR和UV等光谱检测确认其结构；按归一化法测得其纯度均≥98%。苍耳子药材购于安徽省药材公司，产地为河南，经安徽中医药大学药学部李立华主任中药师鉴定为菊科植物苍耳X.sibiricumPart.的成熟带苞果实。色谱纯甲醇、乙腈（SIGMA公司）；甲醇、磷酸、磷酸二氢钠等试剂

7、均为分析纯；蒸馏水（屈臣氏公司）；0.2μm有机针孔滤膜（北京八方世纪有限公司）。2方法与结果2.1苍耳子炮制品制备炮制品制备的主要过程如下：称取去刺苍耳子每份100g，共计16份，备用；参照《中国药典》2010年版附录ⅡD项下砂炒法，取药材8倍量河砂置锅内预热，武火加热至砂子滑利状态，测定离锅底117cm左右处的温度设定为炒制温度[6]，然后再投入苍耳子，秒表计时。以成品的炮制颜色程度来决定炮制时间，每个时间点分别炒制浅黄色和黄褐色的炮制品各一份。炒制至规定颜色和时间急出锅，立即过筛，放凉，即得到不同工艺的苍耳

8、子炮制样品。取苍耳子生品和16份不同工艺的炮制品粉碎，过40目筛，备用。炮制实验重复2次，样品信息见表1。2.2不同工艺苍耳子样品的UPLC指纹图谱建立2.2.1色谱条件[4，7]WatersAcquityBEHC18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流动相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱，0～2.5min，3.0%～10.0%A；2.5～8min