流式细胞仪临床应用手册.docx

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1、BECKMANCOULTER第一部分流式细胞术简介1流式细胞术定义流式细胞仪是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，为生物医学与临床检验学发展提供了最强有力的工具。流式细胞分析技术（flowcytometry，FCM又称流式细胞术，是20世纪70年代发展起来的一种快速、准确、客观的检测技术，它能够同时检测快速直线流动状态中的单个细胞或微球的多项物理及生物学特性--在极短的时间内高速分析上万个甚至是几十万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，对其加以定性定量分析，还可以对特定群体加以分选。目前，流式细胞术已经广泛用于临

2、床应用与基础研究，在免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等医学与生命科学所有领域内发挥着重要的作用。2流式细胞仪工作原理制备成单细胞悬液的标本或单个微粒在上样前进行荧光染色。流式细胞仪检测到上样管后，产生一定的气体压力将待测样本压入流动池。同时鞘液（不含细胞或微粒的缓冲液）在仪器产生的高压作用下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与样本流形成一定的角度，形成一个圆形的鞘液流，包围着细胞或微粒高速流动，使待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，逐个地通过流式细胞仪的激光聚焦区（流动池），从而被检测到，并发出散射光及荧光等多种光学信号。光学信号通过光电信号转换器及电子信号处理系统采集

3、及分析后，最后以图形的形式将数据结果显示在电脑屏幕上。3流式细胞仪的主要结构光学系统，液流系统，信号处理及放大系统，计算机系统LFL2FX-1FX」FJ_2▲亠FL3LAaFl：.4BECKMANCOULTER4流式细胞仪检测信号散射光信号：FSSS荧光信号：FL1FL2FL3FL4…5流式结果数据分析单参数直方图分析双参数等高图分析6流式细胞仪检测样品双参数点图分析双参数点图分析双参数密度图分析三维图分析可用于流式细胞仪检测的样本种类多样，包括各种细胞（如外周血、骨髓、细针穿刺、灌洗液、实体组织、悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球等；血清、血浆、培养上清、细胞裂解液等。如果检测样

4、本为实体组织时，我们可以用物理化学（天然，机械研磨/消化）等方法将其制备成单细胞悬液5X105-1x107cells/ml，并在上机前用300目筛网过滤。7流式细胞仪检测范围细胞结构细胞功能细胞大小细胞颗粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量和细胞周期RNA含量、蛋白质含量细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内/外细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体蛋白磷酸化钙离子浓度•BeckmanCoiater第二部分流式项目检测列表序号项目名称项目内容参考值标本要求1淋巴细胞亚群T细胞亚群EDTA或肝素抗凝全血〜1mlT淋巴细胞CD3+72±7%辅助/诱导性T细胞（Th,Ti）CD3+CD4+43±9

5、%抑制/杀伤性T细胞（Ts,Tc）CD3+CD8+30±9%Th/TsCD4/CD8±B淋巴细胞CD3-CD19+±%NK细胞CD3-CD(16+56)+±%2细胞免疫表型CD45RA/CD45ROEDTA或肝素抗凝全血〜1ml幼稚/静止T细胞CD45RA+CD45RO-记忆性T细胞CD45RA-CD45RO+活化T细胞CD45RA+CD45RO+CD3/CD4/CD29辅助性T细胞（Th）CD3+CD4+CD29+±%诱导性T细胞（Ti）CD3+CD4+CD29-CD3/CD8/CD28抑制性T细胞（Ts）CD3+CD8+CD28-±%杀伤性T细胞（Tc）CD3+CD8+CD28+±%3淋

6、巴细胞亚群活化程度分析HLA-DR总活化T淋巴细胞静止T淋巴细胞活化B淋巴细胞CD3+HLA-DR+CD3+HLA-DR-CD3-HLA-DR+±%±%±%EDTA或肝素抗凝全血〜1ml活化的辅助性/诱导性T细胞CD4+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞CD8+HLA-DR+4细胞因子检测Th1/Th2Th1:IFN-y±%EDTA或肝素抗凝全血〜1mlTh2:IL-4±%5HLA-B27检测HLA-B27/HLA-B7HLA-B27+/HLA-B7-阳性标准：HLA-B27+/HLA-B7-百分比>80%同时平均荧光强度〉EDTA或肝素抗凝全血〜1ml6造血干细胞造血干细胞相对计数造

7、血干细胞绝对计数CD45/CD34CD45/CD34绝对计数微球±%EDTA或肝素抗凝全血〜1ml7白血病/淋巴瘤免疫分型急性白血病1)初治AL分型粗分首选基本抗体：CD45CD10CD19CD34CD13CD33CD7CD117HLADRMPOcCD3CD79a2)AL细分推荐选择抗体：EDTA或肝素抗凝骨髓或外周血调节性T细胞CD4+CD25+FOXP3+AMLCD15CD11bCD64CD4CD16CD