基因工程基本操作程序修改.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序补充：基因的结构（1）原核生物基因结构编码区非编码区非编码区编码区上游编码区下游编码蛋白质调控遗传信息的表达（调控程序）启动子终止子…A‥………ATGTGCACGTAGTTA………...G…T‥…......TACACGTGCATCAAT………...C编码区非编码区非编码区启动子终止子ATGTGCACGTAGTTATACACGTGCATCAATRNA聚合酶AUGUGCACGUAGUUA启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。RNA聚合酶:能够

2、识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质的序列。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列。编码区非编码区原核细胞的基因结构②是调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。（也就是启动子）（2）真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内

3、含子，内含子能转录为信使RNA启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的一个基因的编码区转录出前体mRNA，需把其中的内含子切除，外显子拼接成成熟mRNA。真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较

4、思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码真核基因长1.2基因工程的基本操作程序二.基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定一.目的基因的获取基本操作的四个步骤一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的结构基因2、获取目的基因的方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成生物抗逆性相关基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因

5、等将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）1、基因文库（一）从基因文库中直接获取一、目的基因的获取限制酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装1)基因组文库(Genomiclibrary)是指将某种生物体的全部基因组DNA，用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因

6、。cDNA(互补DNA)：是用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库2)cDNA文库(cDNAlibrary)基因重组反转录酶mRNAcDNA提取某种生物的全部DNA一定大小的DNA片段导入受体菌中储存用适当的限制酶切割将DNA片段与载体连接基因组文库直接分离法(鸟枪法)多用于原核生物2、基因组文库的建立方法某种生物的单链mRNA单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DN

7、A聚合酶3、cDNA文库的构建-----反转录法多用于真核生物文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）基因多少物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较基因组文库与部分基因文库的关系怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性4、从基因

8、文库中得到目的基因的方法寻根问底——为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反