酶联免疫吸附法在食品检验中应用

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1、酶联免疫吸附法在食品检验中应用　　摘要：酶联免疫吸附技术（ELISA）是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合的一种免疫分析方法，具有操作简便、快速、有效、特异性强等特点，能批量检测食品中的药物残留、病原微生物以及转基因食品等。本文主要阐述了酶联免疫吸附法在食品安全检测中的应用。关键词：酶联免疫吸附技术（ELISA）、食品安全、检测食品安全问题是全球关注的焦点，它直接影响人类健康和经济发展，几年前的苏丹红事件、啤酒甲醛风波、人造蜂蜜事件、乃至今年的三鹿奶粉事件都给人们敲响了食品安全的警钟。

2、如何快速、有效检测食品中的毒害残留，保证食品的安全供应是食品检验中的一个重点。酶联免疫吸附技术（ELISA）是在免疫荧光和放射免疫分析技术基础上形成的，将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合的一种免疫分析方法。该方法操作简便、快速、有效、特异性强，能广泛用于临床标本、药物残留、转基因食品以及病原微生物检测等多个领域。本文主要概述了酶联免疫吸附法在食品安全检测中的研究及应用前景。1、酶联免疫吸附法概述1.1原理10ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的

3、抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。1.2分类目前ELISA检测方法的分类仍没有统一的

4、定论，在这些测定方法中都有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即”免疫吸附剂”（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为”结合物”（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。ELISA的主要类型包括双抗体夹心法、间接法、捕获包被法，以及竞争法。其中捕获包被法主要用于测定IgM类抗体；双抗体夹心法和间接法主要用于测定抗体和大分子抗原，适用于临床诊断；而竞争法测定的是小分子抗原，适于食品分析[1]。1

5、02、酶联免疫吸附法在食品检测中的应用2.1食品中微生物的检测微生物检测是评价食品被污染程度的重要指标，一般来说微生物检测分为常规菌检测和致病菌检测。传统检测常规菌的方法是富集培养后计数，对于致病菌检测不仅需要分离培养，还需要进行生化反应鉴定，检测周期长且不易检出潜在的致病菌。比如某些细菌，大肠杆菌、霍乱弧菌等在低温贫营养条件下，可进入“活的非可培养状态”（VBNC），在适当条件下又可以复苏，仍具有致病力。姚斐等[2]用间接ELISA可快速有效检测出VBNC大肠杆菌O157：H7，此外，采用Dot-E

6、LISA检测沙门氏菌，耗时短，比传统方法快4-6d，这都表明了ELISA在这方面有一定的潜力2.2食品中药物残留的检测10食品中的药物残留主要包括农药、兽药的残留以及各种饲料添加剂的残留等，传统的检测方法有气象色谱、质谱以及高效液相色谱等，但这些方法检测痕量药物时成本高、对仪器要求也较高。而ELISA法检测操作简单、灵敏，可同时检测大批量样品，目前已有商业化的ELISA试剂盒可供选择，使得ELISA检测成为普通实验室的常规技术。余向阳等[3]以辣根过氧化物酶对兔抗拟除虫菊酯类农药抗体进行标记，建立了检

7、测蔬菜中多种拟除虫菊酯类农药的直接竞争抑制ELISA方法，用该方法对南京市场107个样品检测的阳性检出率明显高于气相色谱法。Li[4]报道了用间接竞争ELISA法检测杀虫剂吡虫啉，其最低检出量为30ng/mL。岳秀英等[5]建立了酶联免疫吸附法检测牛奶中残留的青霉素，最低检出限为2.0μg/L，达到了国内外行业标准规定的要求。贺亮[6]研究了磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件并进行了筛选优化，建立了直接竞争ELISA检测方法，该法最小检出量为1.97ng/mL，检测范围5ng/mL～200n

8、g/mL。现已开发的商业化酶联免疫ELISA检测试剂盒，可快速定性、定量检测动物组织（肌肉/肝脏/鱼/虾）、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清等样品中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶（SD或SDZ）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺噻唑（ST）药物的残留量。三聚氰胺[C3N3（NH2）3]，俗称“蛋白精”，是一种有机化工原料，常温下为一种无毒无味的白色结晶粉末，添加到饲料中可以冒充蛋白质，少量添加即可大大提高蛋白含量。在饲料中添加三聚氰胺是属于违规行为。陈锡龙等[7]用