最新微生物检验13教学讲义ppt课件.ppt

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1、微生物检验13第一节炭疽芽胞杆菌（Bacillusanthracis，B.anthraci)一、临床意义炭疽是人畜共患的急性传染病主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎2致病物质荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子3芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞

2、，尸体严禁解剖7培养特性：需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温度30～35℃普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状8BAP：12～15h不溶血，18～24h轻微溶血其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落9肉汤—絮状沉淀生长明胶—37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。NaHCO3BAP：--有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)--无毒株—粗糙型菌落1

3、0生化反应：分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气水解淀粉、还原硝酸盐不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不分解尿素在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）11抗原构造：菌体多糖抗原：--与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。--特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。12荚膜多肽抗原：--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细菌生长和扩散--荚膜肿胀试验，对本菌

4、鉴定有意义芽胞抗原：有免疫原性和血清学诊断价值13炭疽毒素：--保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿因子（EF）三个组分--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性--具有抗吞噬和免疫原性14抵抗力：--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃3h才能杀灭--在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年--生物武器15--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化剂较敏感，常用以下方法杀菌：1：2500碘10min、3%H2O21h、4%高锰酸钾15min、0.5%过氧

5、乙酸10min--对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯酶素均敏感16要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策三、微生物学检验17标本的采集与处理皮肤炭疽：病灶深部标本肺炭疽：痰和血液肠炭疽：粪、呕吐物脑膜炭疽：CSF、血液死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。18无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振荡10～15min、静置10min，取悬液65

6、℃水浴30min或85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加0.5%洗涤剂振荡10～15min，离心取沉淀物增菌和分离培养19生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验20痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37℃4h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色G染色初步报告0.2ml注射小

7、白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告21涂片染色：--G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告--荚膜荧光抗体染色核酸检测：核酸杂交分离培养：--BAP、戊烷脒多粘菌素B平板--2%兔血清肉汤增菌→分离培养22鉴定试验：形态和菌落特征生化试验:表11-1串珠试验:--接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，37℃6h，大而均匀成串的圆球状菌体--与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关--类炭疽无此现象23青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，37℃24h生长受抑制不生长串珠

8、和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片24噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h有毒株形成荚膜—黏液型菌落无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种25植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断26第二节蜡样芽胞杆菌(Bacilluscer