多肽切割简介.ppt

《多肽切割简介.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、多肽切割简介切割流程图准备工作切割液的选择切割液的配制仪器设备的调试加入切割液并于摇床震荡抽滤并收集滤液沉淀、离心、洗涤得粗品肽抽干送QC切割前准备工作文件和树脂一一对应检查树脂称重切割液配制切割液低温储存:(-20℃)⒈E液不得超过一周⒉F液不得超过一个月切割液的选择根据肽的序列上氨基酸的不同，选用不同的切割液，除去肽链上氨基酸的保护基团。含有Trp，Met或Cys(Trt)YESNOE液F液切割液的配比E液：TFA:茴香硫醚:苯酚:EDT:水=87.5:5:2.5:2.5:2.5F液：TFA:TIS:水=95:2.

2、5:2.5*注：苯酚的体积是指在熔点下熔融的体积，其他液体为常温下的体积。还原切割液：10ml的E液加100-200mg的NH4I,0.5ml的DMS,摇匀，静置，用上清液！切割液用量一般按10-15ml/g树脂加入切割液。如0.2mmol的合成量，树脂的取代度为0.5左右，这样合成前空白树脂重为0.4克，加上合成后由肽链引起的增重(15肽)，树脂大约0.7g，因此，需要加入大约8ml切割液。切割时间切割时间：是指向树脂中加入切割液开始，到用乙醚沉淀滤液为止这段时间。大部分linker用TFA处理2.5h已经足够，但是

3、要完全去除一些侧链保护基团则须要延长一些时间。切割时间对肽链的影响：切割时间太长，肽链容易断裂，粗品中的产品含量就少；切割时间太短，树脂上的肽链没能完全切下来，或者肽链上氨基酸侧链保护基团不能完全除去。对于30个以上的肽来说，适当延长时间。对于切割不完全的树脂和粗品肽可依据已得粗品的质量、色谱和质谱，考虑重切。减压过滤用切割液将附着在切割管上的树脂洗下来，收集滤液。*注意：标签号码对应。包括树脂切割管、切割液收集管和砂心漏斗上的标签号码一一对应。沉淀、离心、洗涤根据大多数肽在非溶剂中不溶的特性及温度越低，溶解度越低的性

4、质，我们用冷乙醚来沉淀溶解在切割液中的多肽。操作时应注意：1）、看收集管中滤液的量。一般少于15ml的，用一个离心管离心即可；多于15ml的要用两个离心管，以洗涤完全。2）、边倒边用乙醚冲，使在乙醚中析出的肽尽量分散。如出现结块、抱团等现象，应用干净的玻璃棒将其打散。如用玻璃棒还不能将其打散或粘在玻璃棒上，则需将其用TFA溶解后再用乙醚沉淀。3）、离心时，离心机的转速为3500Rad/Min，离心时间为2min，确保肽能完全沉淀下来。4)如序列为短肽或者序列中疏水性氨基酸较多,用乙醚沉淀时需加入一定量的石油醚,再离心。

5、如还不能沉淀下来，则需将上清液旋蒸。得粗品肽抽干送QC将离心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真空12小时以上，送QC检测并复核称量粗品重量。安全防护在切割操作中一定要戴好相应的防护器具(防毒面具,防强酸强碱防腐蚀牛筋橡皮手套,防护面罩),并且检查通风柜是否开启,保持窗户打开以便空气对流。离心机运转时一定要保持顶盖是封闭状态，必须等离心机停止后才能打开顶盖。当三氟乙酸溅到皮肤时,应用大量清水冲洗,然后涂上专用烫伤膏。