最新（谢瑶实验性肌炎动物模型制作的研究1教学讲义ppt课件.ppt

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1、（谢瑶）实验性肌炎动物模型制作的研究1特发性炎性肌病(IIM)的概述以肌肉为靶器官的自身免疫性疾病:PM、DM、IBM病因及发病机制尚不清楚中心环节:免疫调节和免疫反应的异常病理学特点:肌纤维变性坏死和再生伴淋巴细胞浸润DeptofRheumatologyIIM概述免疫组化特点：PM/IBM:“CD8/MHC-I复合物”损伤DM:束周萎缩，B细胞及CD4+T细胞浸润DeptofRheumatology本课题的研究目的建立实验性炎性肌病动物模型深入研究IIM的发病机理观察比较激素、蛋白酶体抑制剂在肌炎动物模型的疗效DeptofRheumatology实验methods（EAM的建立

2、）制备异种肌匀浆，采用Bradford方法测定蛋白浓度设置模型组和对照组，免疫SD大鼠，观察收集资料检测血清肌酶，肌肉组织病理检查，图像分析DeptofRheumatology实验方法（模型组动物免疫方法）免疫时间皮下注射腹腔注射0day肌匀浆＋FCA共1ml（1:1）PT1ml(2ug/rat)7day肌匀浆＋FCA共1ml（1:1）PT1ml(2ug/rat)14day肌匀浆＋FCA共1ml（1:1）21day肌匀浆＋FCA共1ml（1:1）28day肌匀浆＋FCA共1ml（1:1）实验方法（对照组动物免疫方法）免疫时间皮下注射腹腔注射0day生理盐水＋FCA共1ml（1:1

3、）PT1ml(2ug/rat)7day生理盐水＋FCA共1ml（1:1）PT1ml(2ug/rat)14day生理盐水＋FCA共1ml（1:1）21day生理盐水＋FCA共1ml（1:1）28day生理盐水＋FCA共1ml（1:1）实验方法（动物肌炎检测方法）肌酶谱的测定：实验前、免疫注射第1、2、3、4、5周后分别采血4-6ml/只，取上清检测肌酶病理检查：分别于免疫注射后1、2、3、4、5周取大鼠的前肢近端肌肉、前肢后端肌肉、后肢近端屈肌、后肢近端伸肌、后肢远端骨骼肌组织各两条，10％甲醛固定，石蜡包埋，HE染色；新鲜组织同时液氮冻存DeptofRheumatology实验方

4、法（肌肉组织免疫组化染色）骨骼肌组织石蜡切片，常规免疫组化染色，检测炎性细胞表达CD4、CD8、CD20分子的情况骨骼肌组织冰冻切片，常规免疫组化染色，检测肌细胞膜表达MHC-I分子的情况DeptofRheumatology实验方法（EAM的治疗）将肌酶升高的大鼠分为激素治疗组（强的松5mg/d，每日灌胃）蛋白酶体抑制剂治疗组（MG-1321mg/ml，每周尾静脉注射1ml）对照组（未作任何治疗）治疗1个月后处死比较三组间肌酶和肌肉组织免疫病理改变DeptofRheumatology实验结果免疫1周病检未见明显病理改变免疫2周间质炎症反应明显血管腔内及周围炎性细胞浸润HE染色20

5、xHE染色20XDeptofRheumatology实验结果DeptofRheumatology免疫3周纵断面肌纤维坏死横纹消失，炎性细胞浸润免疫5周横断面肌纤维坏死，炎性细胞浸润HE染色40XHE染色40X免疫组化染色20X实验结果DeptofRheumatology免疫组化染色胞膜棕黄色者为阳性20X模型组横断面肌细胞膜上MHC-I表达增加对照组横断面肌细胞膜上MHC-I表达阴性免疫组化染色胞膜棕黄色者为阳性40X模型组肌束间炎性细胞浸润，大部分CD8阳性实验结果DeptofRheumatology免疫组化染色胞膜棕黄色者为阳性40X模型组偶可见到CD4＋T细胞分布于坏死肌纤

6、维内实验结果DeptofRheumatology图7治疗前后EAM的CK值A组：空白组B组：激素组C组：蛋白酶体抑制剂组0200400600800100012001400160018002000A组B组C组EAM分组肌酶水平治疗前治疗后实验结果DeptofRheumatology治疗后EAM大鼠病理分级结果EAM各部位骨骼肌肌肉病理分级A组：空白组B组：激素组C组：蛋白酶体抑制剂组a组：前肢近端b组：前肢远端c组：后肢近端屈肌d组：后肢近端伸肌e组：后肢远端实验结果DeptofRheumatology治疗后肌束膜CD8T细胞的表达情况A组：空白组B组：激素组C组：蛋白酶体抑制剂组

7、结论应用兔骨骼肌匀浆、FCA、PT可以成功建立EAM本研究动物模型与人类PM在肌酶、病理改变上具有相似之处，为人类肌炎的发病及治疗研究提供理论依据MG-132对EAM有一定的治疗作用但疗效不及强的松，MG-132在人类肌炎中的应用有待进一步的研究。DeptofRheumatology谢谢！外伤性脑室内出血TraumaticIntraventricularHemorrhage南华大学第一附属医院神经外科刘晓明李益民蒋文武一概述外伤性脑室内出血（traumaticintraventr